摘要：背景:葡萄球菌感染和生物被膜形成受群体感应机制调控。葡萄球菌RNAⅢ抑制肽可以干预葡萄球菌群体感应系统,阻断葡萄球菌细胞间的信号传导通路,进而抑制葡萄球菌的毒素分泌和生物被膜形成,防治葡萄球菌感染。目的:探讨葡萄球菌RNAⅢ抑制肽(RIP)的人工合成方法。设计、时间及地点:单一样本观察。于2006-08/11在北京宣武医院中心实验室完成。材料:Fmoc-AA、Pipredine、TFA、HMP购自美国MERCK公司;DCC、HOBT、DMAP购自美国ABI公司。方法:采用固相合成法合成RNAⅢ抑制肽,HPLC法纯化,进行质谱分析法、酸水解法、红外光谱分析法和内酰胺酶活性测定法检测。主要观察指标:①合成和纯化结果。②分子量测定结果。③组成成分分析结果。④氨基酸序列分析结果。⑤结构分析结果。⑥生物活性鉴定结果。结果:合成的RNAⅢ抑制肽纯度为97.42%,相对分子质量为914.37,与理论相对分子质量基本一致;与天然RNAⅢ抑制肽具有相同的氨基酸组分、氨基酸序列以及空间结构;生物活性检测证明合成RNAⅢ抑制肽具有和天然RNAⅢ抑制肽相同的功效,可以有效抑制细菌产生RNAⅢ。结论:采用固相合成法成功合成RNAⅢ抑制肽,鉴定分析证实合成的多肽和天然RNAⅢ抑制肽蛋白具有相同的结构和功能。

摘要：背景:课题组在国内首次合成了葡萄球菌抑制剂RNAⅢ抑制肽,并制备了RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层。目的:评价RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层的血液相容性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-10/2007-10在解放军总医院临床药理研究所及医学动物实验中心完成。材料:成年普通级健康新西兰大白兔30只,由解放军总医院动物实验中心提供。方法:将洁净的316L不锈钢片浸渍于5g/L的四元共聚物四氢呋喃和质量分数10%的RNAⅢ抑制肽混合溶液中,获得稳定的聚合物涂层,按1cm2/mL在37℃无菌条件下用生理盐水浸提72h,制得浸提液原液;加入同体积的无菌生理盐水制得50%浸提液。选择溶血实验、凝血实验、血小板聚集实验,测定凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间、观察RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层对兔白细胞、红细胞和血小板的影响。主要观察指标:红细胞溶血率,凝血时间、凝血酶原时间、活化部分凝血酶时间,白细胞、红细胞和血小板数量,血小板聚集情况。结果:溶血实验结果显示浸提液原液和50%浓度浸提液的溶血率分别为3.08%和1.88%,两者的溶血率均<5%,符合医用生物材料的溶血实验要求。凝血实验结果表明浸提液原液和50%浓度浸提液对兔凝血时间无明显影响,对各时间点兔凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间均无明显作用,对兔白细胞、红细胞和血小板数量无明显影响,对兔血小板聚集无明显影响。结论:实验数据表明,国内首次合成的RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层具有良好的血液相容性。

摘要：背景:将葡萄球菌的全面抑制剂RNAⅢ抑制肽和稳定、无毒、具有良好血液相容性的磷酸胆碱结合,制备出磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层,具有良好的药物传递性能,可减少生物材料表面细菌的黏附和生物被膜的形成,从而减少内置物的感染。目的:通过实验评价RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层的血液相容性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-10/2007-10在解放军总医院临床药理研究所及医学动物实验中心完成。材料:采用有机化学固相合成Fmoc法合成RNAⅢ抑制肽,以甲基丙烯酸十八酯、甲基丙烯酸羟丙酯、甲基丙烯酸硅基丙酯和2-甲基丙烯酰氧基-2-三甲基氨基乙基磷酸酯为单体通过自由基溶液聚合合成可交联四元共聚物,将洁净的316L不锈钢片浸渍于5g/L的四元共聚物四氢呋喃和质量分数0.1的RNAⅢ抑制肽混合溶液中,制备聚合物涂层。方法:将聚合物涂层按1cm2/mL在37℃无菌条件下用生理盐水洗提72h,制得洗提液原液;加入同体积的无菌生理盐水制得50%洗提液。根据国家标准GB/T16886-1进行兔溶血实验、凝血实验、血小板聚集实验。主要观察指标:红细胞溶血率;凝血时间、凝血酶原时间、活化部分凝血酶时间;白细胞、红细胞和血小板数量;血小板聚集情况。结果:溶血实验结果显示RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层洗提液原液和50%洗提液的溶血率分别为4.88%和3.66%,两者的溶血率均0.05);RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层洗提液原液组白细胞、红细胞和血小板数量及血小板聚集时间与50%洗提液组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层具有良好的血液相容性。