摘要：为探索建立新的皮肌炎患者外周血Treg淋巴细胞亚群分析方法,利用流式细胞仪设计并优化针对Treg细胞的15色流式染色方案。该文收集了皮肌炎患者和健康志愿者的外周血,用密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。该研究分别对抗体浓度、染色时间、孵育温度、是否避光、荧光素放置时间及上机收样电压等进行优化,最终完成单样品15色高通量流式检测,并结合FlowJo软件对目标细胞Treg亚群进行高阶数据分析。结果表明,(1)BLANK十字架法结合染色指数法可确立方案(Panel)的最适电压值;(2)抗体TIGIT BV421、HLA-DR PE、CD127 BV605、CD103 R718、CD25 PE-Cy7滴定后的最优标记量分别为1.25、1.25、3、2.5、5μL/test(100μL染色体积/test);(3)多色流式抗体染色的最佳条件是4°C、避光条件下孵育30 min;(4)样本制备后应尽快检测,放置时间不超过24 h。该研究中建立的15色Panel可成功分析人PBMC样本Treg细胞亚群及相关活化分子的表达情况。此方法可应用于以皮肌炎为代表的伴有Treg细胞缺陷的外周血Treg淋巴细胞亚群的分析。