摘要：目的构建大鼠STAT3基因的shRNA慢病毒表达载体，并观察其对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法针对STATS基因的不同部位设计4对shRNA的寡核苷酸片段，克隆到慢病毒载体PLKO-1中，构建靶向STA33基因的慢病毒载体PLKO．1-STA33-shRNA，检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。并将其转染大鼠血管平滑肌细胞，用噻唑蓝法和流式细胞仪检测沉默STAT3基因后对血管平滑肌细胞增殖和凋亡能力的影响。结果靶向STA33慢病毒表达载体构建成功。转染PLKO．1一STA33一shRNA后，STA33蛋白表达明显下降，其中以PLKO．1一STA33一S1最为明显，达到90％以上；转染PLKO．1-STA33-S1的细胞增殖能力（A值=0．25±0．05）明显低于未转染组（A值=0．62±0．12）和阴性对照组细胞（A值=0．59±0．11）（P〈0．05）；而早期细胞凋亡率（26．9±2．8）％和晚期细胞凋亡率（9．5±1．6）％均明显高于未转染组和阴性对照组（P〈0．01）。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向STAT3慢病毒表达载体PLKO．1-STAT3-S1，该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖，并促进细胞凋亡。

摘要：目的构建并鉴定靶向大鼠血管平滑肌细胞信号传导子及转录激活子3(STAT3)基因的慢病毒干扰载体。方法针对STAT3基因的不同部位设计4对短发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸片段,克隆到慢病毒干扰载体PLKO.1中,构建shRNA慢病毒干扰载体PLKO.1-STAT3-shRNA-1、2、3、4,并感染大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞。Western blot法检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。结果 Western blot法证实PLKO.1-STAT3-shRNA-1、2、3、4均能抑制细胞内STAT3基因的表达,以PLKO.1-STAT3-S1最为明显。用PLKO.1-STAT3-S1转染血管平滑肌细胞后可以促进细胞凋亡。结论成功构建了靶向STAT3基因的shRNA慢病毒干扰载体。

摘要：目的考察超声强化超临界流体萃取(USFE)大黄5种蒽醌衍生物成分的提取效果。方法采用自行设计的超声强化超临界流体萃取装置,比较超声提取(U)、超临界流体萃取(SFE)和超声强化超临界流体萃取(USFE)提取大黄5种蒽醌衍生物成分的提取率。结果 USFE的合适萃取温度、萃取时间和夹带剂用量分别低于SFE的10℃、30 min、0.5BV,在相同的萃取压力下,USFE对5种蒽醌衍生物成分的提取率较SFE分别提高了2.113%～6.095%。结论超声对超临界流体萃取具有明显的强化效应,USFE具有提取效率高,能耗和生产成本低等优点,能为工业化生产提供参考。

摘要：目的探讨慢病毒介导siRNA靶向下调泛素化特异性蛋白酶USP39对小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及迁移能力的影响。方法设计合成5组siRNA:对照组(si Control)、siRNAUSP39-70、siRNAUSP39-71、siRNAUSP39-72、siRNAUSP39-73,用慢病毒介导siRNA,转染小鼠血管平滑肌细胞VSMC,并用嘌呤霉素筛选稳转细胞。Western blot检测各组干扰效率,挑选出干扰效率最高的siRNA。细胞计数及MTT实验检测细胞增殖能力。Transwell实验检测细胞迁移能力的变化。结果成功建立了稳定下调USP39的小鼠血管平滑肌细胞VSMC(siRNAUSP39-73组)。与转染空载的VSMC(si Control组)及空白对照VSMC(Normal组)比较,siRNAUSP39-73组USP39蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞增殖及迁移能力均明显下降(P<0.05)。结论靶向下调USP39蛋白能抑制血管平滑肌细胞VSMC的增殖及迁移能力。

摘要：目的构建大鼠骨桥蛋白（OPN）基因的shRNA慢病毒表达载体，并观察其对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和凋亡的影响。方法针对OPN基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段，克隆到慢病毒载体PLKO-1中，构建靶向OPN基因的慢病毒载体PLKO-1-OPN-shRNA，检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。并将其转染大鼠血管平滑肌细胞，用逆转录-聚合酶链反应（***）检测VSMCsOPNmRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测VSMCOPN蛋白表达水平；噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞仪检测沉默OPN基因后对VSMC增殖和凋亡能力的影响。结果靶向OPN慢病毒表达载体构建成功。重组慢病毒载体PLKO-1-OPN—shRNA转染后可显著抑制VSMCs的OPNmRNA及蛋白的表达水平，OPN蛋白表达明显下降，其中以PLKO-1-OPN2-shRNA最为明显，达到90％以上；转染PLKO-1-OPN2-shRNA后72h的细胞增殖能力[吸光度（A）值=0．365±0．011]明显低于未处理组（A值=0．941±0．028）和阴性对照组细胞（A值：0．941±0．040，P〈0．05）；而早期细胞凋亡率（20．44±2．69）％和晚期细胞凋亡率（16．79±1．01）％均明显高于未转染组和阴性对照组（P〈0．01）。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向OPN慢病毒表达载体PLKO-1-OPN2-shRNA，该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖，并促进细胞凋亡。

摘要：目的:回顾分析联合冠状动脉搭桥及其相关心脏手术的临床效果。方法:134例患者中,75.4％有Ⅲ-Ⅳ级心绞痛(CCSS),冠状动脉造影示梗阻性病变在左主干(LM)34例次、左前降支(LAD)130例次、对角支91例次、回旋支84例次、右冠状动脉80例次。伴有冠状动脉弥漫性病变41例。左室射血分数(LVEF)18%-69%,其中45％-30％ 50例,<30％ 13例,伴左心室壁瘤56例,同时伴瓣膜功能不全42例。全部患者均在体外循环下行冠状动脉搭桥手术,对36例伴有冠状动脉弥漫性病变者同期激光心肌打孔(TMR),同期左心室壁瘤切除三明治式缝合11例,巨大室壁瘤心内补片左室成形45例;同期心脏瓣膜手术42例。结果:人均旁路2.46支,6例患者需主动脉内球囊反搏(IABP)辅助11-54 h;二次开胸止血6例;室上速/房颤28例,室性心律失常10例,2例电转复,余均药物控制;全组手术死亡3例,死亡原因分别为严重低心排综合征(2例)和多脏器功能衰竭。其余病人手术后心绞痛等症状均缓解,心脏功能明显改善。随访4-60个月(平均12.7月),随访率89％,65例已恢复全日制工作。结论:与单纯冠状动脉搭桥相比,联合冠状动脉搭桥及其相关心脏手术时间长,操作复杂,但只要设计良好的手术方案,仍能取得满意的效果。