摘要：【目的】CRISPR/Cas9 RNP系统是一种高效的基因编辑技术,具有简单、精准等特点,已被广泛应用于动、植物的基因编辑研究中。目前,通过微粒轰击技术将Cas9蛋白和gRNA核糖核蛋白复合体(RNP)导入受体细胞,获得无选择标记的基因编辑植物,该技术的提出为快速创制植物突变体提供了崭新思路。【方法】本研究以白桦(Betula platyphylla×***)BpGLK1基因为编辑的靶基因,采用CRISPR/Cas9 RNP技术开展无T-DNA插入的BpGLK1基因编辑。在白桦BpGLK1基因的第1外显子处设计靶位点,采用PCR扩增技术获得BpGLK1-E1靶位点片段;采用酶切及连接技术构建pAbAi-BpGLK1-E1重组质粒,将该质粒线性化后与Cas9蛋白作用,体外检测CRISPR/Cas9 RNP活性及gRNA的精准性。以白桦合子胚诱导的愈伤组织为受体,采用微粒轰击技术进行BpGLK1定向诱变。【结果】CRISPR/Cas9 RNP体外活性检测显示:Cas9蛋白及gRNA复合体具有裂解活性,可在BpGLK1靶位点的特定位点进行有效切割。以白桦成熟胚为材料,在无光照条件下培养25 d左右可获得幼嫩愈伤组织,以其为受体在轰击距离为12 cm、7584.5 kPa条件下,用包被Cas9蛋白与gRNA(RNP)金粒进行轰击,随后经过分化培养及继代培养可获得叶色呈现黄绿色的glkc突变株,测序结果显示,该突变株的BpGLK1基因产生18 bp的纯合缺失突变。【结论】利用CRISPR/Cas9编辑技术可实现无T-DNA插入的白桦BpGLK1精准突变。

摘要：加强素质教育是时代的要求，进入21世纪，世界科学技术的发展日新月异，知识经济时代已初显端倪。医学院校开展文化素质教育工作是本世纪医学科学发展的需要。加强对医科大学生以人文素质为主的文化素质教育，全面提高医科大学生在文学、历史、哲学、艺术等方面文化素质同时，尤其应加强中医文化修养和中国传统医学的科学精神，对于培养具有创新精神、适应新世纪社会主义现代化建设要求的“中国医生”人才具有重要意义。中医学有五千年历史，植根于中华文化，是我国临床医学生必备的人文素质之一。我院中医教研室作为《中医学》课程教学主体，如何将重视学生人才素质培养的思想在教学过程中体现出来，是医学高校实施素质教育是否真正显效的重要环节之一。

摘要：为实现中西医结合呼吸学课程的网络化教学，探索中西医结合呼吸学研究性教学和协作性教学的新模式，我们运用网络技术和多种图像、视频表现形式，设计了课程项目学习任务、虚拟考试现场任务、网上论坛学习交流等多种建构型课件并建立了相应课件素材库。此教学的设计体现了协作性教学模式的特点，教学实践效果良好。