摘要：根据6型猪细小病毒(porcine parvovirus 6,PPV6)和4型猪细小病毒(porcine parvovirus 4,PPV4)全基因组的保守区域基因序列,分别设计了2对特异性的引物和2种不同荧光基团标记的Taqman探针。经过条件优化,建立能够同时诊断PPV6和PPV4的双重荧光定量PCR方法,并对其特异性、灵敏性、稳定性以及与常规PCR方法的符合率进行研究。结果显示,该方法能够同时检测鉴别PPV6和PPV4,且特异性良好,与猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、日本乙型脑炎病毒及猪细小病毒1型核酸均无交叉反应;本方法灵敏性强,PPV6和PPV4的最小检出限分别为7.7拷贝/μL和9.3拷贝/μL;组间和组内变异系数均未超过2%,具有良好的重复性;利用所建立的双重荧光定量PCR方法对福建省采集的68份猪血清及20份组织样本进行检测,PPV6阳性率为37.5%(33/88),PPV4阳性率为12.5%(11/88),混合感染率为11.36%,该结果与常规PCR的符合率分别为81.8%(PPV6),90.9%(PPV4)和90.05%(混合感染率),并且常规PCR鉴定的阳性样品通过本研究建立的方法复检时均未出现漏检。结果表明,本试验建立的检测方法对PPV6和PPV4的鉴别诊断、病原监测、流行病学调查等具有重要意义。