摘要：应用正交设计法研究幼鳝(Monopterus alba)对必需脂肪酸(EFA)的最适营养需求量。实验在室外池塘小体积网箱中进行。根据三因素三水平正交试验表L9(33),制作9组实验饲料进行生长比较试验。野生幼鳝[体重(37.88±1.5)g,体长(34.5±2.0)cm]经驯化至正常摄食后,经过40 d的饲养,结果得到最大体重生长率60.51%和最大体长生长率10.15%。进一步分析表明,幼鳝对亚油酸(C18:2n-6)、亚麻酸(C18:3n-3)和EPA(二十碳五烯酸C20:5n-3)+DHA(二十二碳六烯酸C22:6n-3)(1∶1)适宜需求量分别为1.33%、0.57%和0.24%,其中C18:2n-6/C18:3n-3、C18:2n-6/C22:6n-3的最佳比例分别为2.34和11.08,黄鳝的必需脂肪酸主要为n-6系列C18:2n-6。此外,幼鳝的体重生长和体长生长存在着相对的独立性,C20:5n-3和C22:6n-3对体重生长影响作用要大于C18:3n-3,而C18:3n-3对体长生长的影响作用则大于C20:5n-3和C22:6n-3。研究同时表明,黄鳝对更长链高度不饱和脂肪酸(C20:5n-3和C22:6n-3)的需求量相对较低,它在饲料中的超量添加对生长的影响不显著。

摘要：采用cDNA-SRAP技术对黄鳝雌雄粘液进行基因差异表达分析,筛选黄鳝体表粘液中与性别相关的分子标记。从64对引物组合中筛选出12对引物组合,共获得123个稳定清晰的扩增位点,并筛选出4条雌雄有差异的条带。这4条特异性条带经过回收、克隆、测序后,将测序结果进行Blast分析,结果发现在GenBank中只有片段1与白鳍豚硫酸盐/硫代硫酸盐CYSA样进口ATP结合盒蛋白有较高的同源性。根据片段1的序列设计1对引物进行半定量RT-PCR反应,结果发现,片段1在雌雄黄鳝体表粘液均可获得扩增条带,但其在雄性粘液中的表达量显著高于雌性。这可能是由于雌雄黄鳝粘液中所存在的表皮细胞和粘液腺细胞有差异所致。

摘要：本试验旨在通过对血清总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性、过氧化氢酶（CAT）活力和丙二醛（MDA）含量的测定，评价不饱和脂肪酸不同添加比例列黄鳝脂质过氧化状态的影响。试验日粮按L9（3^3）正交设计在不含不饱和脂肪酸的基础日粮中添加红花籽油（C18：2n-6来源）、亚麻籽油（C18：3n-3来源）和EPA／DHA混合油脂（C20：5n-3＋C22：6n-3来源）。选用平均体长（34．5±2．4）cm、平均体重（37．8±3．5）g的黄鳝1000尾，随机分为对照组和9个试验组，每组2个重复，每个重复50尾。对照组投喂基础日粮，试验组分别投喂1种试验日粮，试验期31d。结果显示：与对照组相比，各试验组血清中SOD活性差异不显著（P〉0．05）。各试验组血清中CAT活力均有不同程度降低，但与对照组差异不显著（P〉0．05）。各试验组血清MDA含量均有不同程度降低，且1组、3组、4组、5组、6组、7组和8组显著低于对照组（P〈0．05）。综合生长试验可知，在保持较高生长性能的同时，当日粮中不饱和脂肪酸C18：2n-6、C18：3n-3和C20：5n-3＋C22：6n-3含量分别为1．30％、1．55％和0．25％时，黄鳝体内自由基的代谢及脂质过氧化处于最佳平衡状态。

摘要：2008年10月江苏盐城大丰精养异育银鲫(Carassius auratus gibelio)发生严重疾病,从病鱼肝脏、血液及腹水中分离到优势生长的细菌。对分离做纯培养的4株菌(JY081016-1～JY081016-4)进行形态特征、理化特性等表型生物学性状检验;测定了菌株(JY081016-1)的16S rRNA和gyrB基因序列,分析了16S rRNA和gyrB基因序列的同源性,并构建了系统发生树。结果表明,分离菌对供试健康异育银鲫有强致病性,菌株(JY081016-1)所扩增的16S rRNA基因序列长度为1448bp(GenBank登录号:GQ232759),所扩增的gyrB基因序列长度为1177bp(GenBank登录号:GQ232760),其16S rRNA和gyrB基因序列与GenBank数据库中维氏气单胞菌和维氏气单胞菌温和生物型的16S rRNA和gyrB基因序列相似性均在97%以上;根据分离菌的表型及分子特征,判定分离鉴定的4株菌为温和气单胞菌(Aeromonas sobria)。胞外酶及溶血活性检测表明,分离菌均能产生蛋白酶、卵磷脂酶、脂酶,在含7%家兔脱纤血液营养琼脂培养基上呈β型溶血;设计的特异性引物可扩增出溶血素基因。

摘要：嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是一种危害鳜鱼养殖生产的重要病原细菌,为进一步明确该病原菌的分子特征及建立快速检测技术,实验对引起翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)暴发性死亡的病原嗜水气单胞菌进行了致病性、菌株毒力特征研究,同时以嗜水气单胞菌气溶素基因aer A为分子靶标设计引物,利用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了病原嗜水气单胞菌的快速检测方法。结果表明,本次引起翘嘴鳜暴发性死亡的病原嗜水气单胞菌半致死浓度为1.6×10~6 CFU/m L,携带aer A等14种毒力基因,此14种毒力基因可用于其致病性分析及分子检测。以气溶素基因aer A设计引物进行的环介导恒温扩增,结果显示可扩增出阶梯状条带,加入SYBR Green I染色后呈现绿色的阳性反应,而对照组均未出现任何扩增条带且反应体系呈现橙色,表明LAMP检测方法对于嗜水气单胞菌检测具有很好的特异性;灵敏度检测的最低检测限为4.6×10~1 CFU/m L;10种经人工感染的淡水养殖鱼虾组织匀浆增菌液,提取DNA后进行LAMP方法检测,结果均可获得阳性扩增结果,而对照未染菌组呈阴性,表明该方法具有较好的应用性,可应用于嗜水气单胞菌引起的水生动物疾病的检测。

摘要：从江苏连云港东海县多家渔场大量死亡的养殖泥鳅深层溃烂组织、肝胰脏及腹水中分离出大量优势生长的细菌,人工感染试验证明其对泥鳅具有非常强的致病性。对分离菌进行了形态特征、理化特性等生物学性状检验;用PCR方法同时扩增其16S rRNA和gyrB基因,分析了16S rRNA和gyrB2种基因序列的同源性,并采用PAUP4.0的最大简约法(Maximum parsimony,MP)构建了基于2种基因的MP系统发生树。根据分离菌的致病性及表型与分子特征,确定本次引起泥鳅溃疡病的病原菌为气单胞菌属的温和气单胞菌;胞外酶及溶血活性检测表明分离菌均能产生蛋白酶、卵磷脂酶、脂酶及DNA酶活性,在含7%家兔脱纤血液营养琼脂培养基上呈β型溶血,用设计的特异性引物可扩增出病原菌溶血素基因片段;分离菌的耐药谱测定结果显示,对供试49种抗菌药物中的青霉素G等9种药物耐药,对红霉素等4种药物中介,对菌必治等36种药物敏感。

摘要：DNA甲基化是一种重要的DNA修饰方式,它能在不改变DNA一级结构的情况下调控基因的表达,能够维持正常的细胞功能,在胚胎发育、遗传印记中起重要作用。以黄鳝为对象,采用限制性内切酶-PCR检测特定DNA片段是否发生甲基化的方法,研究不同温度、p H值、光照周期条件下DMRT基因在各组织中的甲基化差异。用甲基化敏感的限制性内切酶HpaⅡ酶切黄鳝的性腺、肾、脾、肝、肠等5个组织,根据已知的DMRT2、DMRT3、DMRT4基因序列设计特异的引物扩增酶切产物,并设置未酶切对照组,用1%琼脂糖检测,分析差异条带,若未酶切组泳道出现条带,酶切组泳道也出现条带则判定为阳性结果,否则判定为阴性结果。结果表明:不同生态因子条件下,在5个组织中DMRT2-FR2扩增序列中的位点均表现为阳性结果;DMRT3-FR2、DMRT4-FR2、DMRT4-FR3扩增序列中的位点均表现为阴性结果,说明这4个序列中位点的甲基化状态非常稳定,环境因子的小幅变化对其影响不大。

摘要：黄鳝具有性逆转的特点,为了找到与黄鳝性别调控直接相关的序列位点,分析黄鳝性别相关基因在雌雄中的序列差异,本实验选择了性别相关基因Dmrt3作为研究对象,通过比较该基因在雌雄性腺中的甲基化状态就可以分析出参与性别控制的具体位点。实验通过甲基化敏感的限制性内切酶Hpa II酶切黄鳝的雌雄性腺,根据已知的m RNA序列设计相关引物扩增酶切产物,同时与未酶切的对照组进行比较,分析差异条带并对实验结果进行验证。研究结果发现,Dmrt3-FR2扩增序列中,精巢是去甲基化状态,而卵巢是甲基化状态,可以推测该位点很可能与性别调控相关。本实验补充了从分子学角度研究黄鳝性别调控的不足,同时也验证了用甲基化手段研究黄鳝性别调控的可行性,为其他研究提供了理论依据。