摘要：鉴定分离到的微需氧菌为螺旋杆菌 ,并对该菌进行分型。小鼠皮下或肌肉注射地塞米松使其免疫抑制 ,取小鼠肠内容物培养 ,对分离到的细菌 ,经油镜、电镜观察。然后提取细菌DNA ,用根据螺旋杆菌 (Helicobactersp .)rRNA保守区设计的引物P7 P8进行扩增 ,并对扩增产物分别用MboI、HhaI、XspI内切酶酶切 ,酶切产物用 1 0 %PAGE分析。再用根据螺旋杆菌胆型 (H .bilis)rRNA设计特异引物P7 Pb扩增 ,将扩增产物测序分析。最后 ,将该细菌在Scid小鼠上作动物感染。细菌在油镜下呈鸟翼状 ,电镜下观察到双极鞭毛 ,无周质纤毛。引物P7 P8扩增出 374bp的特异带 ,此片段能分别被MboI、HhaI、Xsp内切酶酶切。引物P7 Pb扩增出364bp的条带 ,测得的DNA序列中存在MboI、HhaI、XspI的内切位点 ,与文献中H .bilis序列比较 ,同源性为 97 5 %。动物感染试验符合Koch准则。

摘要：笔者设计了 3 4对特异性引物 ,以 PCR方法对部分近交系小鼠基因组微卫星多态性进行了检测和分析 ,在所有 3 4条引物扩增带中 ,有 2 5个微卫星位点的长度在不同品系小鼠中存在差异 ,不同品系小鼠之间微卫星长度多态性差异在3 8.3 %～ 5 8.8%之间。微卫星多态性分析是一种快速、经济的遗传监测近交系动物的方法 。

摘要：用小鼠肝炎病毒的MHV1、MHV3、A59、JHM四株分别感染DBT细胞 ,收获病毒 ,提取病毒RNA。依据小鼠肝炎病毒的病毒基因、M结构蛋白、mRNA的基因保守区分别设计出多对引物 ,按各对引物的条件建立了RT -PCR方法 ,比较了不同引物敏感性和特异性 ,并比较选择与MHV同为冠状病毒的传染性支气管炎 (IBV)标准株和野毒株没有交叉的最佳特异引物。敏感性实验检测到 1 0pg的小鼠肝炎病毒RNA。

摘要：根据泰泽氏菌 r DNA序列设计出二对特异引物 ,以标准菌 RJ株和大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌纯化的 DNA为模板 ,进行套式 PCR反应。结果用外引物扩增 ,泰泽氏菌和大肠杆菌均出现 62 5 bp的反应带 ,其它细菌无反应带 ;而用内引物第二次扩增 ,只有泰泽氏菌出现 1 96bp的特异扩增带。将 PCR方法应用于人工免疫抑制的 SD大鼠 ,检出率为 3 0 % ( 9/ 3 0 ) ,同时将此 3 0份血清用间接免疫荧光法 ( IFA)进行检测 ,结果未检出阳性样品。结果提示 ,套式 PCR方法具有特异性强、敏感性高 ,简便快速的特点。

摘要：根据弓形虫 P30基因序列设计二对引物分别进行了 PCR一次扩增和套式扩增 ,结果这两对引物在一次扩增和套式扩增中分别出现预期的扩增片段 91 4bp、5 2 2 bp和 5 2 2 bp;套式扩增出现的条带比一次扩增出现的条带亮度明显增强。提示套式扩增比一次扩增具有更高的敏感性。用外引物进行扩增后 ,最低可以检测到 1 pg的弓形虫 DNA。说明所建立的反应体系具有高度的敏感性。用内引物对人工感染弓形虫的 ICR小鼠血液、组织进行弓形虫 DNA的检测 ,结果均扩增出 5 2 2 bp的扩增带。根据 B1基因序列设计的引物进行 PCR一次扩增和半套式扩增。结果均出现预期的扩增片段 61 9bp、362 bp和 362 bp;用半套式扩增检测感染弓形虫的 ICR小鼠血液、组织时可扩增出5 2 2 bp的扩增带 ,半套式扩增比一次扩增更敏感。

摘要：根据编码31-kDa布氏杆菌蛋白的基因(BSCP31),设计两对引物。对布氏杆菌R型(粗糙型)抗原及S型(光滑型)抗原、大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、螺旋杆菌、绿脓杆菌分别采用两种提取、纯化DNA的方法,并以纯化的各细菌DNA为模板,分别进行内、外引物PCR反应及套式PCR反应,反应时以灭菌超纯水作为空白对照。结果显示:进行内、外引物PCR反应和套式PCR反应时,布氏杆菌R型及S型均出现预期的扩增带594bp、460bp及460bp,且套式扩增后条带亮度明显增强,而作为验证PCR特异性或对照的大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、螺旋杆菌、绿脓杆菌、灭菌超纯水均无扩增带。验证敏感性时用外引物对布氏杆菌R型、S型DNA进行扩增后,最低可检测到1pg的布氏杆菌DNA。

摘要：根据具有高度保守性的编码VP7轮状病毒糖蛋白的基因9序列设计引物,分别进行RT-PCR和NT-PCR扩增,结果:引物Beg9/End9、Beg9-1/End9-1及引物RVG9/aET3、RVG9/aET3-1分别能在一次RT-PCR扩增中出现预期的1062bp和374bp扩增带;引物RVG9/aET3、RVG9/aET3-1在NT-PCR扩增中均能出现预期的374bp扩增带;验证了猴轮状病毒SA11属于血清型3;引物RVG9/aET3进行敏感试验能检测到0.5pg的轮状病毒(SA11)dscDNA。

摘要：以 La Sota毒株和分离到的 4株分别来源于信鸽、肉鸽和鸡的新城疫毒株为研究对象 ,设计了 3对引物用反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)对它们的融合蛋白基因 (F)进行分段扩增 ,并且采用 SDS-PAGE进行结构蛋白分析。两者的综合结果显示毒株之间存在着差异关系 ,具有显著的多态性 :来源于肉鸽的毒株与 La Sota株最为接近 ,而来源于鸡的强毒株与La Sota株差异最显著 ;来源不同的 2株信鸽之间有程度较轻的差异 ,肉鸽和信鸽的毒株之间差异较为明显 ,鸽新城疫和鸡新城疫之间的差异关系较为复杂。表明新城疫病毒存在高度变异性。

摘要：目的建立犬细小病毒的核酸诊断方法(PCR方法)并应用于临床诊断。方法根据犬细小病毒VP2基因序列设计引物,以犬细小病毒标准株、犬传染性肝炎病毒和正常增殖细胞DNA为模板,犬细小病毒扩增出221bp的特异带,将PCR产物连接到pMD18_T Vecter,转化大肠杆菌JM109菌株。重组质粒经测序并经blast比较,与GenBank中已登录的犬细小病毒VP2基因序列进行比较。同时将建立的PCR方法应用于30份犬粪便和病犬组织的检测,并测序。结果PCR产物测得的序列与GenBank的基因序列同源性为100%,粪便检测均无犬细小病毒的特异带,从病犬组织中有6份样品扩增出221bp的特异带,经测序比较,同源率为100%。结论建立了犬细小病毒的PCR检测方法,并能应用于临床诊断。

摘要：建立了伪狂犬病病毒的PCR检测方法,并将沪株伪狂犬病病毒的gE基因扩增片段进行测序和比较分析。根据伪狂犬病病毒gE和gB基因序列设计两对引物,以伪狂犬病病毒SH株DNA和单纯疱疹病毒I型为模板,产物连接到pMD18-T Vector。重组质粒测序后与闽A株序列比较,同源性为98%,与Genebank中已登录的伪狂犬病病毒gE基因序列进行blast比较,同源性在97%以上。gE基因序列比较保守,在疫苗应用及分子诊断方面均有较大的价值。