摘要：0引言 肿瘤抗原及其编码基因的理论研究和实验技术使肿瘤抗原的筛选和肿瘤免疫的研究进入一个新阶段。肿瘤抗原的筛选与鉴定是临床特异性免疫治疗的前提和关键，随着对肿瘤生物学和肿瘤免疫学的深入认识，设计了基于体液免疫的重组cDNA文库的血清学分析（serological analysis of recombinant cDNA expression libraries，SEREX）方法，简便易行。

摘要：椎间盘退行性变是腰背部疼痛的重要诱因,但目前临床上缺乏持久、有效的治疗方法.以干细胞为核心的组织工程技术是目前椎间盘退行性变治疗的主要研究方向,其有效性及可行性已得到证实,但其瓶颈在于椎间盘内难以维持足够数量且活性良好的干细胞.研究显示椎间盘内天然存在着干细胞,生理状态下干细胞可从干细胞巢迁移至椎间盘内,补充不利微环境造成的干细胞质和量的下降,但是这些干细胞并未抑制椎间盘退行性变的发生.因此,研究椎间盘内源性修复失效机制,并探寻关键调控靶点,从而维持椎间盘内干细胞数量及质量,可为原位诱导髓核再生提供理论依据.文献报道椎间盘退行性变的关键诱因（过度压力和低氧）可通过自噬、凋亡、坏死性凋亡导致髓核细胞减少;趋化因子及其受体均参与间质干细胞的迁移等,以上研究结果可为椎间盘内源性修复失效机制的研究提供线索.就目前椎间盘内源性修复失效相关研究现状,从压力、低氧等微环境对干细胞向椎间盘内迁移、椎间盘内干细胞数目减少的机制（自噬、凋亡、坏死性凋亡等）,以及水凝胶材料原位诱导髓核再生等方面的进展进行综述,通过对这些文献的学习,有利于设计、完成后期研究,将为椎间盘内源性修复研究提供方向,为椎间盘退行性变早期治疗提供新的思路.

摘要：背景:在工伤等所引起的腰椎间盘病变的鉴定中,由于缺乏年龄相关的椎体骨赘发生率及其分布的参考值而很难对其做出正确的评判。目的:建立年龄相关的椎体骨赘发生率及其分布的参考值数据库。设计:相互对照的回顾性研究。地点和对象:由华中科技大学同济医学院协和医院骨科和德国海德堡大学骨科医院完成,研究对象:选用德国海德堡大学骨科医院资料库中1980/1999腰椎侧位X线片1240张,男性X线片633张,平均年龄20～87岁;女性607张,平均年龄20～92岁。干预:测量腰椎侧位X片1240张,将T12～L5椎体骨赘分为椎体上缘刺状骨赘及椎体下缘刺状骨赘,均以“有”或“无”记录,男、女两组分别按每10岁一个年龄段分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ组计算骨赘发生率,进行统计学分析。主要观察指标:年龄、性别对骨赘发生率的影响及骨赘分布。结果:椎体骨赘发生率随年龄的增长而增加,Ⅴ组分别为48.5%和33.7%,男性发生率明显高于女性发生率(χ2=4.38,P<0.05);男性骨赘最好发于第4腰椎,女性骨赘最好发于第3腰椎。结论:应用年龄相关的椎体骨赘发生率及其分布的参考值数据库,通过对比分析,可对椎体骨赘的发生情况做出客观评价。

摘要：背景:通过分子生物学技术与组织工程技术相结合以修复骨缺损,是骨科当前重要的研究方向之一。转化生长因子β1作为重要的骨形成因子,在骨代谢和骨损伤修复中发挥着极为重要的作用。目的:观察转化生长因子β1基因修饰的成骨细胞复合仿生基质材料修复鼠胫骨骨缺损的治疗效果。设计:随机对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科。材料:实验于2003-03/08在华中科技大学同济医学院附属协和医院完成。选用健康SD大鼠20只,雌雄不限,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。方法:将转化生长因子β1基因转染的成骨细胞与涂覆多聚赖氨酸的聚DL乳酸仿生基质材料复合,植入鼠胫骨骨缺损模型,术后摄X射线片和组织学检查观察修复情况。主要观察指标:术后4,8周X线摄片和组织学检查情况。结果:20只SD大鼠均进如结果分析,无脱失。①实验组:4周时X线片可见骨痂形成,组织学观察有类骨组织和新骨形成,成骨细胞贴附于基质材料表面。8周时缺损基本修复,新骨密度与自体骨接近。②对照组:4周时X线片未见骨痂形成,组织学观察没有类骨组织形成,基质材料表面成骨细胞贴附较少,材料腔隙中有大量淋巴细胞浸润。8周时植入材料基本吸收,为纤维组织替代。结论:将分子生物学和组织工程学结合修复骨缺损,获得理想的治疗效果。

摘要：背景:近年的体外实验表明,能量代谢相关基因参与了椎间盘细胞对缺氧及营养物质缺乏等不良环境因素的适应机制,但这些基因在压力致椎间盘退变过程中的作用途径尚不十分明确。目的:观察持续压力损伤后,兔纤维环内能量代谢相关基因:低氧诱导因子1α、葡萄糖转运蛋白1和血管内皮生长因子的表达情况。设计:随机对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室及骨科实验室。材料:实验于2005-05/10在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室及骨科实验室完成。选用4月龄清洁级日本大白兔25只,体质量2.5～3.0kg。方法:采用可控压力致兔椎间盘退变模型,将术后存活且加压成功的动物随机分为4组:①对照组(n=5):安装加压装置但不予加压。②24h组(n=5):以15kg轴向压力加压24h。③72h组(n=5):以15kg轴向压力加压72h。④恢复组(n=5):以15kg轴向压力加压24h后恢复48h。造模成功麻醉动物处死,取其纤维环标本,应用RT-PCR检测低氧诱导因子1α和葡萄糖转运蛋白1基因的表达,应用WesternBlot及免疫组化检测血管内皮生长因子的含量及分布。主要观测指标:各组低氧诱导因子1α、葡萄糖转运蛋白1基因表达的情况和血管内皮生长因子的含量及分布情况。结果:25只动物完成手术,20只进入结果分析,2只因椎体骨折导致加压失败,3只术后瘫痪并于1～3d内死亡而导致脱失。①低氧诱导因子1α表达情况:对照组仅见少量低氧诱导因子1α表达,24h组低氧诱导因子1α表达较对照组高20余倍(t=25.022,P<0.01),72h组及恢复组低氧诱导因子1α表达较24h组依次下降。②葡萄糖转运蛋白1表达情况:对照组葡萄糖转运蛋白1少量表达,24h组葡萄糖转运蛋白1表达较对照组显著增高(t=18.314,P<0.01),72h组葡萄糖转运蛋白1表达较24h组略增强(t=2.819,P<0.05),恢复组葡萄糖转运蛋白1表达与24h组接近。③血管内皮生长因子表达情况:对照组未检出血管内皮生长因子,其余各组均有明显表达。72h组免疫组化显示外层纤维环血管内皮生长因子阳性细胞率高于内侧纤维环。结论:持续压力可以显著提高能量代谢相关基因低氧诱导因子1α、葡萄糖转运蛋白1和血管内皮生长因子的表达,这3种基因对纤维环在压力损伤下的适应和修复起重要作用。

摘要：背景:以往的研究表明,ADp14ARF转染p53阳性的肿瘤细胞系,可以发现明显的细胞增殖受阻现象。而转染p53阴性的肿瘤细胞系,尽管也可见肿瘤细胞增殖受阻,但在程度上明显轻于前者。同时转染p14ARF和p53两种基因,既增强p53表达又加强p53积累,能否更易促进肿瘤细胞凋亡?目的:利用基因工程技术构建双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53,并观察其对骨肉瘤细胞增殖生长的抑制作用。设计:随机对照观察。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科。材料:实验于2005-01/2006-10于华中科技大学同济医学院基础医学院免疫教研室公共实验平台完成。人骨肉瘤MG-63细胞有华中科技大学同济医学院免疫教研室细胞室提供。含p53全长基因序列的质粒pIRES-p53和pIRES载体均购自武汉晶赛生物公司。方法:利用基因工程技术,将从培养的正常人肝细胞系L02细胞中扩增出的p14cDNA(0.5kb)亚克隆至pIRES载体中,通过PCR、限制性内切酶酶切鉴定重组质粒pIRES-p14ARF-p53。通过脂质体介导转染入骨肉瘤MG-63细胞中,并筛选出阳性克隆,将细胞分为3组:空白对照组(MG-63细胞),空载体对照组(稳定转染pIRES-neo细胞),p14ARF-p53组(稳定转染pIRES-p14ARF-p53细胞)。①采用流式细胞仪测定转染前后瘤细胞DNA含量和细胞周期。②逆转录PCR(RT-PCR)和Westernbolt对稳定转染后的瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达进行定性和半定量检测。③采用噻唑蓝比色法与细胞生长曲线观察细胞增殖情况。主要观察指标:①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期。②瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达。③细胞增殖情况。结果:成功构建出双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53。①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期:流式细胞仪检测发现转染后的瘤细胞多停滞于G1期。②蛋白表达检测结果:RT-PCR与Westernblot检测证实p14ARF、p53基因在靶细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达。③细胞生长情况:转染MG-63后24,48,72,96h瘤细胞生长抑制率分别为33.43%、69.37%、66.19%、75.26%,与空载体对照组差异显著(P<0.01)。结论:野生型p53和p14ARF可协同抑制骨肉瘤细胞的增殖促进瘤细胞的凋亡。

摘要：背景:生长分化因子5是软骨与骨组织形成、发育的重要调解因子,在诱导软骨形成,促进骨、软骨、肌健韧带损伤修复方面发挥重要作用。目的:小鼠骨髓基质干细胞体外转染真核表达质粒pcDNA3.1(+)/生长分化因子5,检测与软骨形成分化相关的细胞外基质及蛋白多糖的表达。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/12在武汉协和医院中心实验室完成。材料:雄性昆明种小鼠20只,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。生长分化因子5真核表达质粒pcDNA3.1(+)/生长分化因子5为自备。方法:全骨髓贴壁法体外分离培养小鼠骨髓基质干细胞,取传至第3代细胞接种到6孔板,在细胞生长到90%融合时开始转染。设立3组:转染组采用LipofectamineTM2000进行脂质体介导pcDNA3.1(+)/生长分化因子5重组质粒瞬时转染;空质粒组转染空质粒pcDNA3.1(+);空白对照组只加入等量脂质体,其余步骤相同。主要观察指标:转染后72h通过RT-PCR及免疫细胞化学检测生长分化因子5基因与蛋白的表达鉴定转染是否成功,同法检测软骨基质Ⅱ型胶原的表达,转染后14d阿尔辛蓝染色检测蛋白聚糖的表达。结果:转染组有一大小为219bp的特异性扩增条带,骨髓基质干细胞胞浆内呈棕色阳性染色;而空质粒组、空白对照组均未发生生长分化因子5基因转录,无特异性扩增条带,且细胞胞浆未见明显染色。转染组可检测到Ⅱ型胶原基因的表达,基因大小225bp,Ⅱ型胶原细胞胞浆中可见棕黄色染色;空质粒组、空白对照组均未检测到Ⅱ型胶原基因的表达,SP染色均无明显染色。阿尔辛蓝染色后转染组细胞呈蓝染,空质粒组、空白对照组均未见明显异染性着色。结论:pcDNA3.1(+)/生长分化因子5转染骨髓基质干细胞能显著增加Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达,促进骨髓基质干细胞向软骨细胞方向分化。

摘要：背景:前期研究已证实,烟酰胺能够促进椎间盘细胞的增殖并对白细胞介素1β致椎间盘退变起到保护作用,而烟酰胺对椎间盘退变的保护机制还不很清楚。目的:观察烟酰胺对白细胞介素1β诱导体外培养的兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响。设计、时间及地点:实验于2007-11/2008-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成。材料:3～4月龄日本大白兔10只,体质量1.5～2.0kg,取L1～6脊柱节段56个椎间盘组织,用于构建兔椎间盘组织凝胶培养模型。方法:将56枚椎间盘随机分为4组,每组14枚。正常对照组:不加入药物;烟酰胺组:加入0.5g/L烟酰胺;退变组:加入10μg/L白细胞介素1β;治疗组加入10μg/L白细胞介素1β及0.5g/L烟酰胺。培养2周后对各组标本行TUNEL染色及Fas,Caspase-3,Bcl-2,低氧诱导因子1α、葡萄糖转运体1、血管内皮细胞生长因子免疫组织化学染色。主要观察指标:各组标本TUNEL染色及免疫组织化学染色阳性细胞率。结果:TUNEL染色示加入烟酰胺后退变组阳性细胞率较正常对照组上升(P=0.001)。Fas染色退变组阳性细胞率较正常对照组明显上升(P<0.01)。Bcl-2染色示烟酰胺组较正常对照组阳性细胞率升高(P=0.004)。Caspase-3染色示治疗组阳性细胞率较退变组下降(P=0.024),但仍高于正常对照组(P=0.006)。低氧诱导因子1α染色示烟酰胺组阳性细胞率低于正常对照组(P<0.01);退变组阳性细胞率较正常对照组上升(P<0.01)。葡萄糖转运体1染色示治疗组阳性细胞率高于正常对照组(P<0.01)。结论:烟酰胺可以抑制白细胞介素1β诱导的椎间盘细胞凋亡,改善白细胞介素1β导致的椎间盘能量代谢障碍。

摘要：背景:最近研究已经证实,烟酰胺能够促进椎间盘细胞的增殖并对椎间盘退变有改善作用。目的:验证烟酰胺对压力诱发的兔腰椎间盘退变的保护作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-11/2009-04在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室及骨科实验室完成。材料:4月龄日本大白兔24只,体质量2.0kg;烟酰胺为天津市大茂化学试剂厂产品。方法:取24只日本大白兔随机分入1～6组,采用可控轴向压力,以98N压力诱发椎间盘退变建立兔腰椎间盘退变模型,并按分组要求给予兔口服烟酰胺:第1组2只,安装加压装置不予加压或给药;第2组2只,给予50mg/kg烟酰胺口服1周;第3组5只,以98N压力加压1周;第4组5只,以98N压力加压1周,去除压力自行恢复1周;第5组5只,加压1周同时给予50mg/kg烟酰胺口服1周;第6组5只,自加压开始时持续给予50mg/kg烟酰胺,加压1周,然后去除压力后恢复1周。主要观察指标:以Thompson分级法及腰椎间盘磁共振评价退变程度;苏木精-伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及藏红O-快绿染色考察其组织学改变;P16INK4A免疫组织化学染色检测细胞增殖和衰老状态的变化。结果:①第2组椎间盘未见明显退变;第3组5只动物Thompson分级均为Ⅱ级,第4组4只为Ⅱ级,1只为Ⅲ级,第5组2只为Ⅰ级,3只为Ⅱ级,第6组3只为Ⅰ级,2只为Ⅱ级。MRI也显示,服用烟酰胺的动物椎间盘退变程度有所减轻。②第6组纤维环Ⅱ型胶原含量较第4组高约53.2%(P<0.01)。③第2组藏红O染色强度较第1组有所上升;第5,6组髓核和纤维环染色强度均高于第4组的相对应部位,其中以第6组髓核上升最为明显(P<0.01,P<0.01),第6组较第5组有轻微上升。④P16INK4A阳性率随烟酰胺给药时间延长而降低。结论:烟酰胺有助于减轻压力对椎间盘的损伤,能够促进压力损伤后的椎间盘恢复。

摘要：[目的]比较可吸收螺钉与传统克氏针张力带钢丝治疗髌骨骨折的有关问题,探讨可吸收螺钉在髌骨骨折治疗中的价值。[方法]采用聚-DL-乳酸(poly-DL-lacticacid,PDLLA)自膨胀可吸收螺钉治疗髌骨骨折组94例,男53例,女41例;平均40.5岁,平均随访时间32周。传统克氏针张力带钢丝组90例,男47例,女43例;平均38.5岁,平均随访时间30周。2组比较采用成组设计t检验。比较术后2组骨折临床愈合时间,8周时膝关节屈曲角度、与健侧相比关节活动丧失角度,2组手术时间,一次性住院费用和并发症等问题。[结果]通过随访,可吸收螺钉组临床愈合时间平均(10±2.0)周,术后8周膝关节屈曲角度平均为115°±10°、与健侧相比关节活动丧失10°±6.8°,手术时间平均60 min,无1例并发症;传统克氏针张力带钢丝组临床愈合时间(12±2.0)周,术后8周膝关节屈曲角度平均105°±8°、与健侧相比关节活动丧失15°±6°,手术时间平均55 min、一次住院费用平均9 430±1 000元,其中6例克氏针滑出并针眼感染、2例克氏针钢丝断裂、3例再次手术见张力带钢丝松动骨折移位愈合、1例髌骨骨质受损行石膏托固定。[结论]PDLLA自膨胀可吸收螺钉治疗髌骨骨折相比克氏针张力带钢丝法,具有髌骨周围软组织刺激症状少、内固定更稳定的优点。临床愈合时间相对较短,关节功能恢复更理想,病程中住院费用低,无并发症,且无需2次取出内固定,是一种值得推广和进一步探讨的方法。