摘要：根据GenBank数据库K亚群禽白血病病毒（Subgroup K avian leukosis virus,ALV-K）特异性抗原gp85的基因序列,设计一组ALV-K特异性的引物和探针,并构建阳性重组质粒。在对反应体系进行优化的基础上,建立了ALV-K的实时荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验和重复性试验。结果显示,本方法能对ALV-K进行特异性扩增,而对A亚群、B亚群、J亚群、E亚群禽白血病毒和新城疫病毒（NDV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）、禽网状内皮组织增生病病毒（REV）、禽流感病毒（AIV）等禽病病原未见扩增。该方法最低能够检测到3.4×101拷贝数/μL的阳性质粒,灵敏度是RT-PCR的100倍。应用本方法对人工攻毒ALV-K的SPF鸡各脏器进行病毒定量分析,结果显示,在攻毒鸡体内心、肝、脾、肺、肾等脏器中均能检测到ALV-K,且肝、肾和脾中的病毒含量显著高于心和肺（P〈0.01）。

摘要：为探索16S rRNA基因条形码技术在濒危脊椎动物物种鉴定中的可行性,选取脊椎动物线粒体16S rRNA基因中长度为286 bp的片段设计通用引物,以哺乳纲(Mammalia)、爬行纲(Reptilia)、两栖纲(Amphibia)、软骨鱼纲(Chondrichthyes)和辐鳍鱼纲(Actinopterygii)中24科、28属、40种共71个濒危脊椎动物样本为研究对象,进行PCR扩增并对扩增产物进行纯化、测序和基因序列分析。结果显示:建立的检测方法灵敏度可以达0.001 ng/μL,其中62个(39个物种)样本扩增成功,57个样本(34个物种)测序结果与GenBank数据库中的参考序列具有较高相似度,可以鉴定到种的水平。测序所得的基因序列与参考序列的种内遗传距离为0~0.5%、种间遗传距离为1.0%~39.9%,最小种间遗传距离大于最大种内遗传距离,即存在明显的条形码间隔;另外5个样本(5个物种)测序结果在属内种间高度一致,只能鉴定到属的水平。基于16S rRNA基因片段构建的条形码可对濒危脊椎动物进行种属鉴定,可为濒危物种保护、打击非法走私等提供技术支撑。

摘要：为了对熊源性成分进行有效鉴定,本研究根据熊科动物线粒体DNA(mtDNA)序列,使用分子生物学软件Primer Express 3.0设计了一套特异性引物、探针,用以建立Taqman探针荧光PCR检测熊源性成分的方法。结果显示,所建立方法特异性强,15份熊属动物组织样品均出现特异性扩增曲线,20份阴性对照动物样品均未出现扩增曲线;方法灵敏度高,最低可以检测到10个拷贝数量级的重组质粒DNA,对熊胆粉稀释106倍后,仍可扩增出熊DNA;方法稳定性好,对相同的样品在不同时间进行2次重复检测,批内变异系数分别为0.88%、1.13%,批间变异系数为1.38%。结果表明,本研究建立的方法可应用于熊属动物组织及其加工品中的熊源性成分的检测。

摘要：将重组酶介导等温扩增技术(RAA)与成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白12a(CRISPR-Cas12a)检测系统相结合,针对白斑综合征病毒(WSSV)建立快速、灵敏、特异的DNA内切酶靶向CRISPR反式报告(DETECTR)检测系统。针对WSSV保守基因设计RAA引物与crRNA,通过实验筛选最优组合和最佳反应条件,构建WSSV DETECTR检测系统。对该系统进行灵敏度与特异性测试,与WOAH推荐的Real-timePCR和NestedPCR检测方法比较。结果显示,WSSV DETECTR检测系统最低检出限为10copies/μL,灵敏度与Real-time PCR、Nested PCR检测方法相当(均为3.34×10^(1)copies/μL),与其他病原之间无交叉反应,与Real-time PCR、Nested PCR对临床样本的检测结果相一致。结果表明,建立的WSSV DETECTR检测系统具有快速简单、灵敏、特异等优点,为白斑综合征病毒的快速检测提供了新的方法。

摘要：根据传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因序列的保守区域设计并合成多组RPA引物和特异性crRNA,经过筛选与优化,建立RPA-Cas12a系统荧光检测法和试纸条法2种可视化快速检测IHHNV的方法。结果显示,这2种可视化检测方法在37℃恒温反应40 min可检测出IHHNV;与对虾白斑综合征病毒、虾肝肠胞虫和十足目虹彩病毒1无交叉反应;该方法灵敏度较高,最低检测浓度为10 copies/μL;应用该方法对10份IHHNV阳性临床样本进行检测,阳性检出率为100%。综合结果表明,建立的荧光法和试纸条2种可视化检测IHHNV的方法操作简单,反应灵敏,适用于对虾养殖场或基层实验室对IHHNV的定期监测和初筛。

摘要：近年来,常熟市交电家电总公司通过运用规模经营策略,在新形势下求得了新的发展,1993年实现产品销售达2.45亿元、今年1-7月份已实现销售2亿元,展现出广阔的经营发展前景。

摘要：重组酶介导的等温核酸扩增(RAA)技术是一种新的检测技术,本研究分别基于猪丹毒CPS基因序列和猪肺疫KMT基因序列,使用分子生物学软件Oligo 7.0分别设计两套特异性引物、探针,建立猪丹毒、猪肺疫的RAA检测方法,并分别对其特异性、灵敏度和稳定进行测试。结果显示,所建立的两种方法将巴氏杆菌、丹毒杆菌显著区分于大肠杆菌O157、金黄色葡萄球菌、胸膜肺炎放线杆菌、单核细胞增生李斯特菌、支气管败血波氏杆菌、Ⅱ型猪链球菌等其他猪细菌性传染病病原,单个样品检测时间约20分钟,最低均可检测到100个拷贝数量级的重组质粒DNA。

摘要：猪流行性腹泻病是一种急性传染病,在我国各省均有发生,幼龄猪的发病率和死亡率较高。本研究拟建立一种能够快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光RT-LAMP方法,为早期诊断和治疗提供技术支持。根据GenBank公布的猪流行性腹泻病毒核蛋白基因设计一套特异性LAMP引物,使用荧光PCR仪对待检样品进行检测,根据扩增结果判断所检测样品是否含有猪流行性腹泻病毒。除已确诊为猪流行性腹泻病的病猪样品外,其余参考样品在本方法中均未出现特异性扩增曲线,检测下限为102拷贝的质粒模板,病猪小肠样品的阳性检出率为100%。本研究建立的方法特异性强、灵敏度高、检测速度快,可广泛应用于猪流行性腹泻的快速筛查及实验室检测。

摘要：2017年2月广东CDC首次报告了一种新的H7N9流感病毒变异株,该变异株在血凝素(HA)基因的裂解位点发生了插入型突变,从而成为对禽高致病性的H7N9流感病毒(HP-H7N9)。因此,急需建立一种快速简便的H7N9流感病毒检测方法。根据HP-H7N9的HA基因序列,设计一组HP-H7N9特异性的RT-LAMP引物,在对反应体系进行优化的基础上,建立了HP-H7N9的RT-LAMP检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验。结果显示,本方法只对HP-H7N9特异性扩增,而对低致病性H7N9病毒(LP-H7N9)、H7N3流感病毒(H7N3)、H3N2流感病毒(H3N2)、H5N1禽流感病毒(H5N1)、H9亚型禽流感病毒(H9)、新城疫病毒(NDV)、甲型H1N1流感病毒(H1N1)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)等病原未见扩增。该方法最低能够检测到2.97×105 copies(10-6稀释度)的阳性质粒,具有良好的检测灵敏度。本方法操作简便,对设备需求较低,试验耗时短,反应结果可直接肉眼观察判读,适用于基层兽医站所、养殖场及野外监测点的HP-H7N9的快速筛查和监测。