摘要：由猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的繁殖障碍性疫病在中国的不断暴发,增加了猪的发病率和死亡率。为了建立同时检测这3种病毒的多重PCR方法,本研究根据GenBank中这3种病毒的参考基因序列设计引物,并对反应中的影响因素进行优化,建立了同时检测CSFV、PRV和PRRSV的多重PCR方法。该方法扩增的基因片段大小分别为570(CSFV),232 (PRRSV)和173bp(PRV)。敏感性和特异性试验结果显示,该方法对3种病毒的核酸最低检出量分别为23.88(CSFV),13.10(PRRSV)和14.60pg(PRV),对大肠杆菌(***)、沙门菌(Salmonella)、猪乙型脑炎病毒(JEV)及猪圆环病毒2型(PCV2)的检测结果均为阴性。对2015年5月至2016年1月收集的168份临床样本检测结果显示,CSFV阳性率为24.4%,PRRSV阳性率为21.4%,提示河北省该段时间内引起猪繁殖障碍性疫病的主要病原为CSFV和PRRSV。经多重PCR检测为PRRSV、PRV或CSFV阳性的临床样本,再次使用商品化的试剂盒进行检测,符合率为100.0%。这些结果表明,本试验建立的多重PCR方法省时、高效,可用于PRRSV、PRV和CSFV感染的临床诊断。

摘要：副猪嗜血杆菌（***）、猪圆环病毒2型（PCV2）及猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒（PRRSV）是引起猪呼吸系统疫病的3种重要病原，根据GenBank中这3种病原的基因组序列，选择基因序列的高保守区，分别设计合成了3对特异性引物进行3种病原的多重PCR，并对反应条件进行优化。利用建立的多重PCR方法，对河北省2012-2013年发生呼吸系统疾病的412份猪病料进行检测，并随机选择其中的57份，同时进行单一PCR检测，以确定2种方法检测结果的符合程度。结果表明，3对引物能特异扩增出大小分别为469，829，219bp的目的条带。灵敏度检测试验表明，***，PCV2和PRRSV的最低检测量分别为52．7，335．0，137．0Pg。412份临床样品检测结果显示，***在2012年的阳性率为44．2％，2013年为45．1％，提示这2年引起猪呼吸道疫病的主要病原是***。