摘要：目的系统评价经冠状动脉自体骨髓干细胞移植（BMSC）治疗急性心肌梗死的安全性。方法全面检索PubMed、MEDLINE、Cochrane EBM、BIOSIS等数据库。以急性心肌梗死症状出现24h内成功实施再灌注治疗者为研究对象；试验设计体现随机对照原则；经冠状动脉移植细胞类型为非动员自体BMSC。结果5项研究入选总病例数620例，随访4—18个月。死亡、再次心肌梗死、血运重建等临床不良事件及其联合终点的发生均显示出BMSC移植的有益趋势，但差异无统计学意义。分层分析显示，BMSC移植显著降低急性心肌梗死1年后死亡、血运重建、因心力衰竭再入院或再次心肌梗死联合终点发生率（OR=0．45，95％CI 0．28—0．74，P=0．002）；急诊经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术后4—7d行干细胞移植可降低血运重建发生率（OR=0．60，95％CI 0．37—0．97，P=0．04）及死亡、血运重建或再次心肌梗死联合发生率（OR=0．58，95％CI 0．37—0．91，P=0．02），而术后24h内移植可显著增加血运重建和再次心肌梗死的联合发生率（OR=2．56，95％CI 1.03—6．34，P=0．04）。结论经冠状动脉自体BMSC移植治疗急性心肌梗死是安全的，而且急诊PCI术后4—7d移植较术后24h内移植安全性更好。

摘要：目的:筛选慢病毒介导2型阿诺碱受体(RyR-2)RNA干扰的有效靶序列。方法:设计5条RyR-2干扰候选靶序列,将靶序列构建到慢病毒载体中,在HEK-293T细胞中包装成慢病毒,感染心肌细胞,通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法鉴定靶序列干扰RyR-2的效果。结果:通过数据库获得5条RyR-2干扰靶序列,成功构建shRyR-2慢病毒载体,获得高效感染心肌细胞的慢病毒;感染心肌细胞后实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹显示shRyR-2_1007具有较高的干扰效果(P<0.05)。结论:成功筛选出高效的RyR-2RNA干扰靶序列。

摘要：目的:为了解决小口径(直径7mm以下)人造血管术后通畅率低下的问题,利用生物-人工复合血管,结合分子生物学手段,将转入血管内皮生长因子(VEGF165)基因的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)种植于复合血管内腔面,为解决此临床难题提供新的思路和手段。材料方法:构建VEGF165真核表达质粒pCI-neo-VEGF165,获得正确的质粒用于转染HUVEC。从中科院购买HUVEC(代号:ECV-304),用脂质体介导法将pCI-neo-VEGF165转入细胞,经G418筛选后,计数阳性克隆,以比较脂质体和质粒在不同比例情况下转染效率的高低。实验组按质粒和脂质体比例的不同分为4组:1μg/3μl;2μg/6μl;2μg/8μl;3μg/12μl。ELISA检测瞬时转染后HUVEC培养上清中VEGF的表达。再将VEGF165基因瞬时转入HUVEC,利用自己设计的旋转培养装置,将细胞均匀地粘附、种植于复合血管内腔面。复合血管是人工材料(聚酯)和生物材料(成纤维细胞长入,胶原形成)有机结合而成,是将包有聚酯网的硅胶棒埋入绵羊背部皮下组织,3个月后取出,抽去硅胶棒而得到的。结果:脂质体转染效率以2μg/8μl组阳性克隆数最多;ELISA测定瞬时转染后HUVEC培养上清中VEGF的表达量为532·5±43·1pg/ml。使用旋转培养装置的细胞均匀地粘附于复合血管,未使用者细胞积聚于血管腔面下部;转入和未转入VEGF165基因的HUVEC在复合血管内腔面覆盖面积百分比分别为69·9%±3·5%、43·7%±2·5%,有明显改善。结论:转入VEGF后可促进HUVEC在复合血管上生长,旋转培养装置有利于细胞的均匀粘附。

摘要：目的运用双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)介导血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)之间的相互作用,推测其可能是参加动脉粥样硬化等心血管疾病过程的重要机制之一。方法将LOX-1与AT1受体质粒共转染COS7细胞,给予ox-LDL(50ug/ml)刺激后,检测细胞中p-ERK表达水平。根据BiFC载体和AT1、LOX-1基因序列设计引物,将AT1、LOX-1基因克隆到BiFC特异性的荧光载体上,得到重组BiFC质粒:phmKGN-MN-AT1,phmKGC-MN-AT和phmKGC-MC-LOX-1,phmKGN-MC-LOX-1,配对共转染HEK293细胞,用ox-LDL(50ug/ml)刺激,研究AT1受体和LOX-1的相互作用;构建G蛋白偶联受体家族中另一蛋白肾上腺素受体β2(β2-adrenergi creceptor,β2AR)的BiFC重组质粒:phmKGN-MN-β2AR和phmKGC-MN-β2AR,分别与LOX-1对应的BiFC质粒转染HEK293细胞,ox-LDL(50ug/ml)刺激后,观察细胞荧光。结果用ox-LDL刺激转染AT1与LOX-1受体质粒的COS7细胞,可以引起p-ERK表达升高;成功构建AT1、LOX-1、β2AR的BiFC重组质粒;将AT1和LOX-1的BiFC质粒共转染HEK293细胞,用ox-LDL刺激后,可以观察到绿色荧光。而转染β2AR和LOX-1的BiFC质粒,用ox-LDL刺激后未检测到荧光。结论初步验证ox-LDL可以诱导LOX-1与AT1受体特异性相互作用。

摘要：目的:筛选慢病毒介导PC4 RNA干扰的有效靶序列。方法:通过数据库设计3条PC4干扰候选靶序列,将靶序列构建到慢病毒载体中,转入HEK-293T细胞后,感染H9C2心肌细胞。通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法鉴定靶序列干扰PC4的效果。结果:成功构建shPC4慢病毒载体,获得高效感染心肌细胞的慢病毒;感染心肌细胞后实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹显示,shPC4-1具有较高的干扰效果(P<0.05)。结论:成功筛选出高效的PC4RNAi靶序列。

摘要：目的系统评价经冠状动脉自体骨髓干细胞移植(BMSCs)对急性心肌梗死患者左心室功能的影响。方法检索PubMed、MEDLINE、中国期刊全文数据库等国内外数据库。以急性心肌梗死症状出现24h内成功实施再灌注治疗者为研究对象;试验设计体现随机对照原则;移植细胞种类为非动员的自体BMSCs;具有3个月以上左心室功能的随访资料。结果7项随机对照研究共纳入545人,平均随访4.9个月,BMSCs移植术后左心室射血分数(LVEF)较基线增加8.89%(95%CI3.42,14.36;P=0.001),与对照组相比,其绝对增量增加5.65%(95%CI2.24,9.06;P=0.001);移植组左心室舒张末容积/腔径基线测量值与随访值相比显示出更有利于基线的显著改变(P=0.01),且改善程度与对照组相比差异无统计学意义(标化均差-0.23;95%CI-0.59,0.12;P=0.20);移植组左心室收缩末容积/腔径较基线测量值无显著改变(标化均差-0.11;95%CI-0.32,0.11;P=0.33),而与对照组相比却显著缩小(标化均差95%CI-0.53,-0.09;P=0.005)。结论BMSCs移植治疗显著改善了心肌梗死后LVEF,并有效防止了左心室收缩末容积的不良增加,但未有效改善左心室心肌重构。

摘要：目的初步探讨血流切应力及COUP-TFII基因对动脉粥样硬化的影响。方法实验分为动物模型部分和细胞水平部分。动物模型部分:利用以往创建的动脉移植到静脉的新西兰白兔模型,取移植动脉段,苏木精-伊红(H-E)染色光学显微镜下观察血管内、中膜厚度与面积;扫描电子显微镜观察内皮变化,透射电子显微镜观察超微结构改变;TUNEL方法观察细胞凋亡状况,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测基因及蛋白表达水平。细胞水平部分:培养人动静脉内皮细胞,RT-PCR和免疫荧光染色法检测COUP-TFII及动脉内皮标志性分子Jagged1和Notch1。设计小分子RNA(RNAi)阻断COUP-TFII的表达用以观察该基因功能。结果动物模型部分:H-E染色发现移植动脉在极低切应力状态下,随时间推移,管壁发生由厚变薄的“类静脉化”的萎缩样改变。TUNEL结果显示移植动脉发生了细胞调亡,而且调亡先发于血管内膜细胞,进而过度到中层,最后累及外膜。显示了低切应力作用于血管内膜层细胞致使其凋亡继而由内而外信号转递的过程,这构成了移植动脉发生萎缩样变的结构及分子基础。除血管细胞凋亡外,血管纤维的崩解在移植动脉萎缩样变过程中发挥作用。通过弹力纤维和胶原纤维双染色证实,弹力纤维在整个过程中数量并未显著改变,而胶原纤维却发生崩解导致数目逐渐减少最终管壁萎缩。而导致胶原纤维降解、管壁萎缩的分子基础金属基质蛋白酶(MMP)2和MMP9在动脉移植后表达呈一过性升高。细胞水平部分: COUP-TFII基因在静脉内皮表达而在动脉内皮不表达;当COUP-TFII被阻断后,培养的静脉内皮细胞开始表达动脉内皮细胞的特征性标记Jagged1和Notch1;而且当COUP-TFII被阻断后,静脉内皮细胞在基础水平及血管紧张素II(Ag II)刺激下对单核细胞株(THP1)的粘附能力均增强。结论动脉和静脉所处的血流动力学环境及内在基因分布的区别,可能是造成两者对粥样硬化发生状况迥异的基础。