摘要：目的:利用3种方法对新城疫(Newcastle disease virus,NDV)病毒进行检测并对这3种检测方法的优缺点做出比较。方法:分别将NDV强毒F48E9和弱毒Lasota接种SPF鸡胚后,获取尿囊液。利用双抗夹心ELISA法、悬液芯片系统以及RT-PCR进行检测。通过对制备的针对新城疫病毒的抗体4D9和6C4蛋白浓度测定后,选择6C4进行生物素标记,将4D9作为固相捕获抗体,利用生物素-链霉亲和素放大系统构建双抗夹心检测体系。通过对Genebank上已发表的新城疫强弱毒F基因进行电脑分析后,设计一组针对NDV强弱毒的通用型引物,分别对强弱毒进行RT-PCR并检测其检出限。结果:ELISA法对NDV强弱毒尿囊液的检出灵敏度为1∶160,但操作繁琐,耗时长;液相芯片对强弱毒尿囊液的检出限为1∶160和1∶320,然而和ELISA相比,操作较为方便,但仪器设备昂贵。RT-PCR对强弱毒RNA检出限分别为259pg和14pg,与前两种方法相比,PR-PCR在核酸水平上对病毒进行检测,理论上灵敏度较高,但是所需试剂、设备昂贵,且实验人员还需一定的技能培训。

摘要：选择玉米内州萎蔫病菌基因组DNA高度特异保守区域设计环介导等温扩增技术(LAMP)引物,通过对其反应条件优化,建立玉米内州萎蔫病菌的LAMP检测体系。实验得出内引物与外引物最佳比例为6∶1,反应最佳温度为64℃。运用玉米内州萎蔫病菌克隆质粒梯度稀释液对LAMP检测体系的灵敏度进行了验证。LAMP检测体系的检测限达到100 fg,与常规PCR相比,该方法的检测限提高了100倍。以多种参比菌DNA为模板对LAMP检测体系的特异性进行了验证,结果表明LAMP检测体系仅对玉米内州萎蔫病菌有扩增,对非靶标菌没有扩增。为玉米内州萎蔫病菌快速高效检测提供了一种新型的检测方法。

摘要：利用改良逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术建立一种快速、灵敏的检测方法用于H9亚型禽流感病毒检测。根据H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区序列中的8个区段设计6条特异性引物,在恒温条件下进行核酸扩增反应,并以琼脂糖凝胶电泳和目视检查绿色荧光两种方法对扩增结果进行判定。结果表明,RT-LAMP的最小检测限为100 fg,灵敏度比PT-PCR高100倍,且与H5亚型、H7亚型禽流感病毒,新城疫病毒(NDV)无交叉反应。目视检查绿色荧光与常规琼脂糖凝胶电泳的判定结果一致。整个扩增检测过程在35 min内即可完成。利用临床样本对RT-LAMP法进行验证,结果与RT-PCR一致。由实时浊度分析得到的标准曲线,计算出临床样本中的病毒质粒拷贝数均在2×107-2×104之间。因此,本研究建立的RT-LAMP方法快速、灵敏、特异性强,是H9亚型禽流感病毒的一种高效检测方法。

摘要：目的利用DNA聚合酶链式反应(PCR)扩增技术,建立一种敏感、特异的结核分枝杆菌检测方法,并探讨该方法在早期检测结核分枝杆菌中的应用价值。方法以结核分枝杆菌特异性较好的插入序列IS6110基因片段为目的序列,设计一对特异性引物,对结核分枝杆菌H37Rv、大肠杆菌、肠炎沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌进行聚合酶链式反应扩增检测。结果只有结核分枝杆菌H37Rv菌株经聚合酶链反应扩增后可见247 bp的特异性条带,其余5种非结核分枝杆菌菌株扩增产物经电泳后均未出现特异性条带。敏感性实验可检测出10 fg结核分枝杆菌DNA。结论插入序列IS6110 DNA聚合酶链反应(PCR)是一种敏感、特异的结核分枝杆菌H37Rv的检测方法,为结核分枝杆菌的早期实验室检测提供了新的参考。

摘要：为建立一种新城疫病毒(NDV)的简便、快速、高灵敏度的检测方法,本研究根据NDV融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,在恒温水浴中进行核酸扩增反应,对反应温度、反应时间以及反应液中Mg2+浓度进行优化,获得最佳反应条件,结果经凝胶电泳分析并在可见光下直接观察。整个RT-LAMP检测用时0.5 h,检测敏感度比RT-PCR高100倍,对禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒无交叉反应。本研究建立的NDV RT-LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强,操作简单等特点,有望在核酸扩增检测方法中取代RT-PCR技术。

摘要：目的为检测环境中可能存在的致癌物,建立生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45(GADD45α)双荧光素报告基因系统,构建新型人GADD45α荧光素酶报告基因质粒。方法在GADD45α基因启动子序列2.2 kb及其后基因组DNA序列2.6 kb范围内,设计3对引物进行搭桥PCR,获得全长为4924 bp的目的序列,插入pGL4.10[luc2]质粒相应位点内。质粒构建成功后测定全长并进行酶切鉴定。结果正确扩增了全长为4.9 kb的人GADD45α基因片段,成功构建了人GADD45α报告基因质粒(pGD2.2K-luc2)。结论在质粒设计中加入了存在p53非依赖性BRCA1结合位点的GADD45α基因第1个内含子,构建成功的pGD2.2K-luc2,为转染人源性细胞建立GADD45α双荧光素报告基因系统打下了基础。

摘要：目的建立恶性疟原虫纳米磁分离实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测恶性疟原虫,为输入性恶性疟防控提供技术支持。方法根据恶性疟原虫基因组18S rRNA保守区序列,设计并合成引物和探针;构建质粒标准品,拟合标准曲线,采用纳米磁分离法提取核酸,建立恶性疟原虫纳米磁分离实时荧光定量PCR检测法,并进行该方法的灵敏度和特异性评价。结果与常规法（镜检法和快检法）相比,该方法检测恶性疟原虫更加灵敏,并具有良好的特异性,在（2.5×101-2.9×108）copies/ml拷贝数范围内循环阈值（Ct值）与质粒标准品拷贝数的对数值之间存在良好的线性关系（R2=0.999）;应用该方法从非洲维和部队13名归国人员中检出1例低水平恶性疟原虫感染者,而常规法（镜检法和快检法）未检出。结论该方法能够快速准确地检测恶性疟原虫,在口岸低密度恶性疟原虫感染者的检测中具有很大的应用价值。

摘要：目的建立实时荧光逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP),对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)进行现场快速检测。方法在充分比对SARS-CoV-2与其他相关病毒基因组序列后,针对其核衣壳蛋白N基因序列设计了RT-LAMP引物组,经优化反应条件后,进行特异性、灵敏度与添加回收试验。结果建立的RT-LAMP方法对SARS-CoV-2的检测特异性良好,优化条件后在102~107体外转录RNA拷贝/反应的范围内,RT-LAMP反应荧光信号达到最大值的扩增时间(peak time)与每个反应内模板RNA初始拷贝数的对数值的线性方程为y=-1.486x+19.63,R2=0.9921,线性关系良好。检测可在30 min内完成,检出限以体外转录RNA为模板达到200拷贝/μl。结论自主研发建立了可以特异性检测SARS-CoV-2的实时荧光逆转录环介导等温扩增快速检测方法,可用于新冠肺炎病例确诊和人群筛查。

摘要：国产SPE 606S全自动大体积固相萃取仪,基于国内目前大体积水样前处理面临的问题,引进国外先进部件,结合国内用户需求和市场反馈而设计。仪器在0.1ug/L加标水平下,8种有机氯农药的回收率在73.7%-108.1%之间,仪器同一个通道的重现性RSD(n=5)在1.2%-7.6%之间,仪器六个通道间的平行性RSD在1.7%-8.3%之间。该仪器平行性好,自动化效率高,为大体积水样的前处理提供了极大便利。