摘要：目的 :了解长沙地区献血员输血传播病毒 (TTV)感染情况 ,初步探讨该病毒感染与肝炎的关系。方法 :根据己报道的TTV基因保守序列 ,设计两对引物以套式聚合酶链反应 (nested PCR)对 1 82份献血员血清标本进行TTVDNA检测。结果 :45份单纯ALT升高血清标本TTV阳性 1 6例 (3 5 6%) ,1 2 9份ALT正常血清标本TTV阳性 2 1例 (1 6 3 %)。ALT升高组TTVDNA的阳性率明显高于ALT正常组 (x2 =7 40 ,P <0 0 5)。序列分析结果显示 ,献血员TTV分离株相应位置核苷酸序列与日本株和中国株的同源性≥ 97 1 %。结论 :长沙地区献血员中TTV感染率较高 ,TTV感染与肝炎密切相关 ;长沙地区分离的TTV可能与日本株AB0 0 83 94和中国株AF0 791 73属同一基因型。

摘要：目的探讨利用分子生物学方法直接快速检测临床标本中淋球菌gyrA基因突变的可行性。方法设计针对淋球菌gyrA基因的特异扩增引物,运用聚合酶链反应-单链构象多态性技术(PCR-SSCP)对95份泌尿生殖道标本直接进行基因及突变检测,并与测序及药敏试验结果进行对比分析。结果32份分离培养阴性的标本无特异性扩增产物,而63份分离培养阳性标本以及对应的分离菌株均能扩增出168 bp片断。以淋球菌标准株ATCC19424为对照,分离菌株对环丙沙星敏感的5份临床标本与标准株SSCP带型相同;分离菌株对环丙沙星中介或耐药的58份临床标本与标准株SSCP带型均不同,共出现5种突变带型。5份SSCP分析显示,无突变的标本gyrA基因序列未发生改变;16份SSCP分析显示,有突变的标本gyrA基因序列均有改变;具有相同突变的标本SSCP带型完全相同,具有不同突变类型的标本SSCP带型不同。结论PCR-SSCP银染技术可简便、快速、准确地检测临床标本中淋球菌对氟喹诺酮类药物的敏感性。

摘要：目的构建His标签的金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药相关蛋白FemA的融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌中表达,为进一步研究femA基因的生物学功能和临床应用奠定基础。方法根据GenBank中金黄色葡萄球菌femA基因序列,利用Primer Premier 5.0设计PCR引物,并在引物的5'加入BamHI及SalI酶切位点;以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模版,PCR扩增出femA基因片段。将目的 DNA片段及质粒pQE30分别进行双酶切、连接并转化大肠埃希菌DH5α;阳性克隆以PCR、双酶切及测序进行鉴定。将鉴定正确的pQE30-femA重组质粒转化大肠埃希菌JM109,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-femA融合蛋白;采用SDS-PAGE及Western blot分析对表达蛋白进行验证。结果经PCR、双酶切鉴定及序列测定,证实重组质粒pQE30-femA构建成功;重组质粒pQE30-femA转化大肠埃希菌JM109经IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western blot分析显示表达出53 kD目的蛋白;经Bandscan软件分析,目的蛋白质在4 h的表达量占细胞总蛋白的27.5%。结论成功构建了His-FemA原核表达载体(pQE30-femA),并在大肠埃希菌中高效表达。