摘要：设计一时ＰＣＲ引物，其中上淤引物的５’端除目的基因外，还加Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列。以质粒（ｐＳＶＬＤ３）为模板，通过ＰＣＲ扩增出带有Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列的１３９ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能。经测序发现该ｃＤＮＡ有２个碱基变异。以此ＰＣＲ产物为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。针对该核酶唯一的自裂位点及两个重要的单链区，设计并合成３条反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）。当在转录反应中间时加入合成的３条ＡＳＯＤＮ后，核酶的自裂率均下降较明显，其中，针对核酶自裂位点的ＡＳＯＤＮ效果更突出，当其浓度为４０μｍｏｌ／Ｌ时，核酶自裂率为２％，当浓度为１μｍｏｌ／Ｌ时，核酶的自裂完全消失。结果启示ＡＳＯＤＮ可与核酶的自裂位点区及两个重要的单链区结合，从而抑制核酶的自裂活性。

摘要：介绍用自己设计的简单灌注装置 。

摘要：以质粒（ｓＳＶＬＤ３）为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到一条１３９ｂｐ的片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能，将上述片段插入到ｐＧＥＭ－３Ｚ中，经筛选、鉴定，得到一重组质粒（ｐＨＤＶ１０８），经测序发现有２个碱基变异，以该质粒为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。针对核酶两个重要的单链区，设计并合成二条反义寡核背酸（ＡＳＯＮ），当在转录反应中同时加入ＡＳＯＮ后，核酶的自裂率下降均较明显，当ＡＳＯＮ浓度为１６ｕｍｏ１／Ｌ时，核酶自裂抑制率均在７０％以上。提示，ＡＳＯＮ可与核酶两个重要的单链区结合，从而抑制核酶的自裂活性。

摘要：目的建立慢性乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的滚环扩增(RCA)方法。方法以27例慢性乙型肝炎患者的肝组织cccDNA和血清松弛环状DNA(rcDNA)为研究对象。根据中国患者HBV基因序列特点设计4对引物,分别可与HBVcccDNA的正、负链结合。在Phi29DNA聚合酶的作用下,获得线性多拷贝cccDNA扩增产物,以该产物为模板获得cccDNA全序列;通过对模板的系列稀释鉴定RCA方法的灵敏度;以RCA产物为模板扩增肝组织cccDNA的反转录酶区基因,并与同时扩增的同时间采集的同一患者血清中的rcDNA序列进行比较。结果成功建立了HBVcccDNA全序列的RCA方法,最低可检测到10个拷贝的cccDNA分子,并获得了所有扩增cccDNA的全基因序列。27例患者中,18例患者的肝组织cccDNA和血清rcDNA反转录酶区的序列完全一致,9例患者中共检出84个不同的核苷酸位点,平均每个患者9.3个,84个不同核苷酸中只有5个引起了氨基酸的改变。结论滚环扩增方法对肝组织HBVcccDNA的检测具有较好的灵敏度。该方法的建立对深入了解cccDNA在HBV致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效有重要意义。

摘要：以质粒 pSVLD3为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增得到1条139bp 的片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组 RNA 中核酶(Ribozyme)区的 cDNA,该核酶具有自身裂解功能,将此片段插入到 pGEM-3Z 中,经筛选、鉴定得到重组质粒 pHDV108,经测序发现有2个碱基变异。以该质粒为模板,通过T7 RNA 聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其自身裂解产物,自裂率达71%。针对核酶唯一的自裂位点,设计并合成1条反义寡核苷酸(ASODN),当在转录反应中同时加入 ASODN 后,核酶的自裂率明显下降,当 ASODN 浓度分别为1、2、4、8和16μmol/L 时,核酶的自裂率分别为28.0%、17.0%、8.0%、2.0%和0.0%,自裂抑制率分别为56.0%、73.0%、88.0%、97.0%和100.0%。结果显示 ASODN 可与核酶的自裂位点区结合,从而抑制核酶的自裂。