摘要：用MTT显色方法对体外传代K562,SW1116,Bcap-37和HR8348细胞分别进行了抗癌药物敏感性、抗癌药物调变,激素和激光光动力学作用的研究,均得到较稳定的结果。各项研究带有共性的结果是K562等细胞在一定范围内与理化作用的强度及作用时间长度呈正相关。因而,在实际应用中,可根据不同的实验对象和目的,对MTT法的实验条件作各种特定性设计。本文提出成功的MTT试验对照孔OD值宜超过0.5。并就理论最高血药浓度C_(max)、1/10 C_(max)及由Cmax降至30％抑瘤时药物浓度的倍减次数的价值进行了讨论。

摘要：目的构建人反义Hsp70重组质粒[pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As]并观察其对乳腺癌Bcap-37细胞凋亡特性的影响。方法依照人hsp70mRNA全长序列,通过计算机分析,设计一对引物,在上游引物中带有1个BamHⅠ位点,经RT-PCR扩增、电泳、回收和纯化hsp70144-517片段,通过T-A克隆到pGEM-TEasy原核表达质粒中,经DNA测序和EcoRⅠ酶切图谱鉴定;EcoRⅠ酶切产物回收后亚克隆到pcDNA3.1(+)质粒中EcoRⅠ位点之间,利用BamHⅠ酶切图谱筛选反向插入重组质粒,经DNA测序得到pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As重组质粒。以脂质体介导法将pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As转染到乳腺癌Bcap-37细胞中并克隆培养建株得到AsHsp-Bcap细胞。以DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞周期分析观察转染细胞的凋亡特性。结果本研究成功构建人反义hsp70重组质粒[pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As];转染到乳腺癌Bcap-37细胞后在DNA琼脂糖凝胶电泳上观察到细胞凋亡特征性DNALadder及流式细胞周期分析发现G1峰前有1个特征性Ap峰(亚二倍体峰)。结论构建人反义重组质粒pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As对乳腺癌Bcap-37细胞有促进细胞凋亡的作用。