摘要：利用人H1 RNA启动子、EGFP基因及Neomycin抗性基因,构建用于禽类细胞基因持续沉默和快速筛选的实用型RNAi载体。在将pCDNA3.1(+)载体上的SV40启动子替换为鸡源的β-actin启动子后,装入EGFP基因表达框以及用于驱动外源shRNA转录的人H1 RNA启动子,构建成同时具有EGFP和Neomycin抗性双标记的RNAi载体,并为载体引入独特设计的含媒介序列的多克隆位点以方便外源shRNA编码小片断插入后的快速筛选,载体设计非常实用。插入靶向EGFP和sIgMλ基因的shRNA编码序列后分别瞬时转染DF-1和DT40细胞,结果显示靶基因表达得到了明显抑制。联用EGFP和Neomycin双标记快速筛选sIgMλ轻链基因稳定沉默的DT40细胞克隆的结果也证实,H1启动子转录shRNA的干扰效果是高效的,双标记筛选策略不仅有效而且方便、快捷。

摘要：本研究旨在分离鉴定河南鸡群马立克病病毒（Marek’s disease virus，MDv）流行毒株，了解当前MDV分子进化特征并为鸡马立克病（MD）的有效防控提供参考。根据MDV基因组设计了meq、gE、gI、gB、pp38以及132～bp重复序列基因的特异性引物，应用PCR扩增和DNA测序分析对河南焦作土鸡群8份MD疑似病例进行了确诊，并通过鸡胚成纤维细胞（CEF）盲传培养和间接免疫荧光试验（IFA）分离鉴定了3个流行毒株，分别命名为HNJZ101、HNJZ102和HNJZ103。结果显示，3个MDV分离株均为血清1型（MDV1）毒株，未发生禽网状内皮增生症病毒（REV）共感染，并且132-bp重复序列基因均为双拷贝。meq、gE和gI基因核苷酸序列比对分析发现，临床病例样本及3个MDV新分离株的meq基因与国内外温和毒或疫苗毒株的meq基因核苷酸序列同源性仅为64．7％～78．8％，但与MDV强毒株的同源性高达98．9％～100．0％；gE和gJ基因的核苷酸序列同源性均较高，分别为99．1％～99．9％和99．3％～100．0％。系统发生树分析结果表明，HNJZ101、HNJZ102和HNJZ103与绝大多数此前分离的河南毒株及国内MDV强毒株同处于一个大的进化分支。研究结果表明，3个分离株HNJZ101、HNJZ102和HNJZ103很可能是当前河南土鸡群中流行的致病性MDV—1毒株，其确切的致病型及导致免疫失败的原因仍有待进一步深入研究。

摘要：利用来源于油菜fae1基因编码区的长498bp的2个片段,反向连接于1个83bp的内含子两端,构建成RNAi载体,以期在油菜中转录后能有效抑制fae1基因的表达。所构建的RNAi载体最终序列全长2 066bp,经限制性内切酶消化及序列测定验证,其序列结构与设计一致。通过农杆菌介导的油菜转化,获得油菜再生株系29个。