摘要：试验旨在建立一种快速检测牛、羊、猪、犬布鲁氏菌病的多重PCR方法。根据布鲁氏菌IS711拷贝数的差异和基因序列上的缺失序列设计4对引物,优化多重PCR反应体系和反应条件,分析了PCR的特异性、灵敏度、稳定性。建立的多重PCR方法对牛、羊、猪、犬布鲁氏菌均能扩增出预期片段,扩增片段大小分别为494、732、591、272bp。牛、羊、猪、犬布鲁氏菌的灵敏度分别为1.1×102、5.1×102、3.5×102、2.5×102 CFU/mL。初步应用该方法检测人工模拟的牛奶样品,灵敏度能达到1.0×103 CFU/mL。本试验建立的多重PCR检测方法简单、快速、灵敏度高,具有很好的应用前景,对牛、羊、猪、犬布鲁氏菌病的鉴定具有重要意义。

摘要：目的建立蓖麻毒素和相思子毒素蛋白质芯片检测方法。方法制备并纯化蓖麻毒素和相思子毒素单克隆抗体。采用竞争免疫法检测抗原,建立检测蓖麻毒素和相思子毒素的蛋白质芯片检测方法。应用蛋白质芯片检测两种毒素的模拟样品。结果应用蛋白质芯片检测蓖麻毒素、相思子毒素和两种毒素混合的模拟样品时,在其相应区域均没有荧光信号,结果为阳性,与实验设计相符。结论已成功建立了蓖麻毒素和相思子毒素蛋白质芯片检测方法,该方法具有广阔的应用前景。

摘要：目的建立一种能够满足现场快速检测、完全脱离实验室仪器设备的大肠埃希菌O157∶H7多重PCR检测方法。方法利用大肠埃希菌O157∶H7抗原基因保守序列fli Ch7和rfb E设计2对引物,并对Palm PCR G1-12退火温度、循环数、引物浓度及引物最佳比例进行优化,建立微量快速检测大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行验证。取疑似病牛粪便共9份,利用粪便DNA提取试剂盒提取DNA,按照建立的PCR方法进行扩增,扩增产物经微型电泳仪电泳检测并照相。结果确定大肠埃希菌O157∶H7 PCR的最佳退火温度为54℃,循环数为25个循环,上下游引物浓度为10μmol/L,2对引物最适比为fli Ch7∶rfb E=1∶3。大肠埃希菌O157∶H7扩增产物可见625 bp(fli Ch7)和213 bp(rfb E)的特异性片段,而大肠埃希菌(ATCC25922)、猪链球菌2型、金黄葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、小肠耶尔森菌、单增李斯特菌、沙门菌的PCR检测结果均为阴性,最低扩增DNA浓度为10 pg/μl,重复扩增5次均可见目的条带。9份疑似病牛粪便样品中,共检测出7份大肠埃希菌O157∶H7阳性样品。结论建立了大肠埃希菌O157∶H7微量快速多重PCR检测方法,该方法特异性、灵敏性和重复性均良好,可在现场约1 h报告结果,对突发性传染病的防治具有重要意义。

摘要：为探讨靶向核糖体进入位点(IRES)区域的siRNA在真核细胞中对FMDV复制的抑制作用,对FMDV WFL株的IRES序列进行了保守性分析和二级结构预测,选择了靶向IRES保守的功能核心区的病毒复制原点附近的2个干扰靶位,设计并构建了shRNA真核表达质粒,转染到IBRS-2细胞后感染FMDV,通过双抗夹心ELISA和real-timeRT-PCR检测FMDV复制情况,结果表明,针对IRES区域的RNAi能够在一定程度上抑制FMDV的复制。

摘要：为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对口蹄疫病毒(FMDV)2B基因的抑制作用,针对WFL株FMDV的2B基因,设计了4个siRNA,并将shRNA表达模板插入pSilencer1.0-U6载体,构建shRNA表达质粒,将其与含绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP+2B融合表达质粒瞬时共转染BHK-21细胞,以荧光显微镜和流式细胞仪检测荧光表达量的变化,以实时定量RT-PCR法检测对2B基因mRNA的抑制作用。结果表明,本试验所构建的针对2B基因的shRNA表达载体可以在BHK-21细胞中抑制2B基因的瞬时表达。

摘要：以口蹄疫病毒WFL株为试验株,对口蹄疫病毒的IRES序列进行了保守性分析和RNA二级结构预测,推测高度保守的FMDV复制原点区域位于容易被siRNA结合的IRESRNA二级结构的环区,因此,在该区选择确定了2个siRNA干扰靶位,设计并合成能表达其小发夹结构shRNA的表达模板,克隆到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口蹄疫病毒IRES区的siRNA真核表达系统,为进一步研究针对该区的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用打下了基础。