摘要：目的构建表达肿瘤增殖基因Ki67小干扰RNA(Ki67-siRNA)的选择性增殖溶瘤腺病毒。方法设计有小发夹结构的Ki67-siRNA对应模板DNA序列,煺火处理后克隆至pCA13质粒,构建重组质粒pCA13-Ki67。用BglⅡ从pCA13-Ki67酶切出包含CMV启动子及Ki67-siRNA模板DNA序列的表达框,将此表达框克隆进选择性增殖腺病毒质粒pZD55,构建重组质粒pZD55- Ki67。将pZD55-Ki67与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞,9～12 d后出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA,聚合酶链反应(PCR)鉴定正确者即为选择性增殖溶瘤腺病毒ZD55- Ki67。大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。结果成功构建了表达Ki67-siRNA的选择性增殖溶瘤腺病毒。结论成功构建的ZD55-Ki67为利用Ki67-siRNA靶向肿瘤治疗奠定了基础。

摘要：目的构建人白细胞介素18（IL-18）基因复制缺陷型腺病毒表达载体。方法以质粒pJWIL—18为模板，设计并合成上、下游引物，利用多聚酶链反应（PCR）扩增获得IL-18基因片段，酶切后克隆至pCA13质粒，构建重组质粒pCA13IL—18。鉴定正确后，将pCA13 IL—18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染HEK293细胞，9-12天出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA。进行PCR鉴定。大量扩增后，氯化铯梯度离心纯化腺病毒，测病毒滴度。结果酶切分析、序列测定、PCR验证表明，IL-18基因成功克隆到复制缺陷型腺病毒载体中。结论成功构建了表达人IL-18基因的复制缺陷性腺病毒载体。