摘要：园林工程从设计到施工阶段,都着眼于完工后的景观效果,总目标是为人类及动植物创造良好的生存环境,满足人们不断提高的精神生活。文章结合工作实际,提出了在园林施工过程中应注意的几个问题。

摘要：为提高儿童玩具寿命,提供合理的新设计。文章通过解读延续性、分析儿童玩具案例的方式,明确了延续性具体表现在产品对使用者心理的引导和使用功能的延展。从具体案例分析出发,总结设计要素,进行设计定位,得到实践产品。围绕实践产品的结构与功能、造型与操作、色彩与材料等梳理出优化的方案,以此验证延续性对儿童玩具提供助力。

摘要：目的研制一张针对大学生群体的中医健康状态及心血管疾病危险因素调查问卷。方法根据问卷调查的设计原理和方法,结合文献研究、专家咨询等方法,在中医理论指导下,基于中医健康状态及心血管疾病危险因素的概念,通过构建问卷结构、产生条目池及其答案、预调查、条目筛选以及信度效度检验等过程,形成大学生中医健康状态及心血管疾病危险因素调查问卷。结果形成了以自评为主的封闭式问卷,问卷的结构内含中医健康状态及心血管疾病危险因素2大部分,其内容可归类为15个方面,共由67个条目组成。讨论制定的调查问卷具有较好的信度和效度,可用于大学生中医健康状态及心血管疾病危险因素的流行病学调查研究。

摘要：慢性心力衰为本虚标实之证,气阳两虚或气阴两虚为本,痰瘀、水停为标,"瘀"为中心环节。多从八纲辨证、脏腑辨证立论,益气活血、温阳利水,益气养阴、活血化瘀,宣导三焦、泻肺豁痰、活血利水为主要治疗方法,在改善临床症状、提高生活质量、防止病情反复等方面具有明显优势。目前研究受辨证及实验设计影响,未能明确阐明作用机理,未来可将中医理论有机的结合到临床治疗中,与现代药理知识融会贯通。

摘要：目的构建带有FLAG标签的BPIFC基因真核表达载体,建立稳定转染BPIFC基因的HaCaT细胞系。方法设计引物通过PCR扩增出BPIFC基因片段,利用DNA重组技术将该基因片段定向插入pcDNA3.1-flag-N真核表达载体中,并对重组质粒进行双酶切及DNA测序鉴定。验证正确的重组质粒通过PI Max线性转染的方法转染至HaCaT细胞,通过G418筛选建立BPIFC稳定转染的HaCaT细胞系,并通过RT-PCR法和Western-blot法分别测定BPIFC mRNA和蛋白的表达量。结果双酶切和DNA测序结果表明,pcDNA3.1-BPIFC真核表达质粒构建成功。RT-PCR结果表明,重组质粒的mRNA表达量高于空载转染组和空白对照组;Western-blot结果显示,BPIFC融合蛋白在HaCaT细胞中成功表达。结论成功建立BPIFC稳定转染的HaCaT细胞系,可表达带有FLAG亲和标签的BPIFC蛋白用于后续实验研究。

摘要：今天我们要把自己编织的围巾交给老师送到灾区。我看见思诗手上有一条做工非常精细的围巾。一边还有一个洞。思诗解释说，这是专门设计的，围巾穿过洞就围上了。我怀疑这围巾不是她织的。回家后，我给她奶奶打了电话，果然这个围巾是她买来的。

摘要：根据编码增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的开放读码框(open reading frame,ORF)设计引物,PCR方法扩增出5'端带His标签的EGF PORF,利用杆状病毒表达系统构建表达EGFP基因的重组杆状病毒DNA分子,转染sf9细胞。取细胞培养上清进一步感染sf9细胞,荧光显微镜下观察EGFP蛋白的表达,Ni柱亲和层析纯化表达的EGFP蛋白,并将纯化后的EGFP用于EGFP特异性体液分析。结果显示成功克隆了EGF PORF,荧光显微镜观察到重组杆状病毒表达的EGFP,Ni柱亲和层析可获得纯度达90%的EGFP蛋白,纯化后的EGFP蛋白仍然具有良好的免疫原性,能作为包被抗原分析体液免疫效果。利用杆状病毒表达系统制备EGFP,具有产量高、纯化方便及生物活性好的特点。

摘要：目的真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F),并完成蛋白纯化及纯度测定。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,PCR方法扩增出3′端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体,经核酸序列分析后,进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体,限制性内切酶鉴定,用脂质体Lipofectamine 2000转染COS-7细胞,72h后再用Western blot检测目的蛋白的表达。Ni柱亲和层析纯化COS-7细胞表达的F蛋白,高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度。结果核酸序列分析证实获得带His标签的RSVF基因序列,没有发生无义突变。转染COS-7细胞后,利用Western blot方法检测到F蛋白的特异性条带,纯度达99%以上。结论初步建立了真核表达RSVF蛋白的纯化方法,为进一步优化RSVF蛋白制备条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础。

摘要：目的研究人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial viruse，RSV）分泌型融合蛋白（secreted fusion protein，sV）基因在杆状病毒中的表达及纯化。方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物，以PCR方法将F蛋白基因的跨膜区和胞质区核酸序列替换为6×His核酸序列，获得COOH’端带有His标签的重组SF-His蛋白编码基因，利用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统，构建可表达sF蛋白的重组杆状病毒，用脂质体Cellfeetine reagent转染sf9细胞，实现sF在sf9细胞中的表达，Ni柱亲和层析纯化sF蛋白。结果成功获得了sF-His编码基因，构建的重组杆状病毒可高效表达sF，Ni-柱纯化后sF的浓度为1．084mg／ml，纯度达90％以上。结论杆状病毒系统是制备sF的有效方法，纯化的sF蛋白为RSV新型疫苗及单克隆抗体和诊断试剂等研究奠定了基础。