摘要：目的 对17α羟化酶17,20碳链裂解酶缺陷症（17OHD）1个家系4人进行分子诊断。方法 对2013年南京军区福州总医院收治的17OHD患者及其母亲、小姨和妹妹全血中抽提基因组DNA,设计8对引物,采用PCR扩增产物直接测序方法进行基因突变分析。结果 先证者的临床表现符合17OHD,其家族中未有其他病例。先证者序列分析表明,其CYP17A1基因第8外显子存在9个碱基（GACTCTTTC）缺失,导致第487-489位氨基酸缺失,使P450c17酶完全失活,从而导致17OHD。其母亲和小姨为该位点杂合缺失,妹妹未检测到同一缺失。结论 建立了基于CYP17A1基因突变分析的分子诊断方法,可以对17OHD进行准确的分子诊断,并可为遗传咨询及其产前诊断奠定基础。

摘要：目的 :构建小鼠特异性乳酸脱氢酶 (LDH)C亚基的原核重组载体并进行表达和鉴定。　方法 :提取小鼠睾丸总RNA ,逆转录合成cDNA ,自行设计引物 ,PCR扩增小鼠LDH C亚基编码序列 ,PCR产物经BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ 双酶切后 ,克隆至谷胱甘肽S转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 2T中 ,在E .coliBL2 1中诱导GST融合蛋白的表达。　结果 :在异丙基 β 硫代半乳糖苷 (IPTG)的诱导下 ,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为6 0 0 0 0的产物。对重组质粒的序列分析表明 ,插入片段的序列与GenBank登录的编码序列完全一致。　结论 :小鼠LDH C亚基的全长编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX 2T ,并在E .coliBL2

摘要：目的构建人卵细胞ZP 3蛋白的原核重组载体并进行表达和鉴定。方法提取人卵巢中总RNA,逆转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增ZP 3蛋白编码序列,PCR产物经B amH I/N heⅠ双酶切后,克隆至表达载体pET-H is中,在*** li BL 21-DE 3中诱导ZP 3融合蛋白的表达。结果在异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为50 000的产物。结论人卵细胞ZP 3蛋白的全长编码序列已被克隆至ZP 3蛋白融合表达载体pET-H is,并在*** li BL 21-DE 3中获得高表达。

摘要：目的　构建人血浆蛋白 S的原核表达载体并诱导其表达。方法　自行设计引物 ,采用 PCR法 ,以现有人血浆蛋白 S真核表达载体为模板 ,扩增人血浆蛋白 S成熟肽的编码序列。 PCR产物经 Eco RI和 Bam HI双酶切后 ,克隆至 GST融合表达载体 p GEX-2 T中 ,在 *** BL2 1 中诱导 GST-人血浆蛋白 S融合蛋白的表达。结果　对重组质粒的序列分析表明 ,插入片段的序列与 Gen Bank登录的人血浆蛋白 S基因编码序列完全一致。 1 0 % SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示 ,在IPTG的诱导下 ,BL2 1 重组菌高效表达分子量约为 96k D的产物 ,并可通过 GST亲和层析柱纯化。结论　人血浆蛋白 S编码序列已被克隆至 GST融合表达载体 p GEX-2 T,并在 *** BL2 1

摘要：目的:构建人蛋白S(protein S,PS)的原核表达载体并诱导其表达。方法:自行设计引物,通过PCR技术,以人PS真核表达载体为模板扩增PS成熟肽编码序列,PCR产物经EcoR1/BamH1双酶切后,将其克隆至GST融合表达载体pGEX-2T中,在*** BL21中诱导GST-PS融合蛋白的表达。结果:聚丙烯酰胺凝胶电泳(10%SDS-PAEG) 显示,在IPTG的诱导下,BL21重组菌高效表达出一个分子量约为96kD产物,与预期大小相符,该产物可通过GST亲和层析柱纯化。对重组质粒的序列分析表明,插入片段的序列与Genebank登录的人PS基因编码序列完全一致。结论:人PS 编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-2T,并在*** BL21中获得表达,为进一步研究奠定了基础。

摘要：目的　构建人肾上腺脑白质营养不良 ( adrenoleukodystrophy,ALD)蛋白 ( ALD protein,ALDP) ATP结合区的原核重组载体并进行表达和鉴定。方法　自行设计引物 ,通过 PCR技术 ,以人全血 RNA为模板扩增ALDP ATP结合区编码序列 ,PCR产物经 Eco R /Xho 双酶切后 ,将其克隆至 p GEX-4T-2载体中 ,在大肠杆菌 BL2 1中诱导 GST融合蛋白的表达。结果　在 IPTG的诱导下 ,重组菌高效表达出一相对分子质量约为42 0 0 0的产物 ,与预期大小相符。对重组质粒的序列分析表明 ,插入片段的序列与 Genbank登录的编码序列完全一致。Western blot结果显示 ,目的条带可被鼠抗人 ALDP单克隆抗体识别。结论　人 ALDP ATP结合区的编码序列已被克隆至 GST融合表达载体 p GEX-4T-2 ,并在大肠杆菌 BL2 1中获得高表达。

摘要：目的:克隆和原核表达小鼠受精抗原-1(FA-1)基因。方法:自行设计引物,用RT-PCR从小鼠睾丸组织总RNA扩增FA-1基因的编码序列。将扩增产物克隆至 GST 融合表达载体pGEX-2T。以IPTG诱导GST融合FA-1的表达。结果:凝胶电泳显示PCR扩增产物的分子量与预期的508bp一致。重组质粒经BamH I/EcoR I双酶切后产生一个约500bp的片段。对重组质粒的序列测定表明,插入片段的序列与发表的FA-1基因编码序列相符。在IPTG的诱导下,BL21重组菌高效表达出一个分子量与43kDa相近的产物(预期44.2kDa)。该产物可通过GST融合蛋白纯化试剂盒得到纯化。结论:小鼠FA-1编码序列已被成功地克隆至GST融合表达载体pGEX-2T。