摘要：目的:建立一种痢疾志贺菌、沙门菌和单增李斯特菌的多重PCR诊断方法。方法:根据伤寒沙门菌VipR基因、痢疾杆菌侵袭性质粒抗原H(ipaH)基因和单增李斯特菌溶血素hlyA基因序列作为目的基因片段痢疾志贺菌、沙门菌和单增李斯特菌的特异性抗原基因序列,分别设计一对引物,优化各种工作条件,建立一种多重PCR诊断方法。结果:本法特异性好,敏感性可达104拷贝,整个实验过程在3 h～5 h内完成。结论:建立的方法在理论和实际应用上都有优越性,且一次可检测出三种病原菌,可用于临床诊断。

摘要：目的建立并应用检测儿童下呼吸道感染WU多瘤病毒（WU polyomavirus）的实时荧光定量PCR（real-time fluorescentquantitativePCR，FQ—PCR）方法。方法选择WU多瘤病毒的VP2基因作为检测的目标基因，设计FQ—PCR引物和检测探针，以重组质粒为标准品建立标准曲线，并对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价；应用该方法对温州医学院附属温岭医院收集的临床下呼吸道感染患儿的痰液、咽拭子846份及血清标本846份进行定量检测。结果本研究建立FQ—PCR检测方法，质粒标准曲线的方差系数为0．998，灵敏度可达到50拷贝；应用该方法检测700份痰液标本，检测到7例阳性标本，146份咽试子标本中未检测到阳性标本，总阳性率为1．00％（7／700），846份血清标本未检测到阳性标本。结论本研究建立的rQ—PCR方法可以特异、快速、灵敏地对儿童下呼吸道感染的WU多瘤病毒进行定量检测；痰液标本较咽拭子或血清标本更适用于WU多瘤病毒感染的核酸检测。

摘要：目的:建立一种检测肾移植术后患者尿中BK病毒的荧光PCR方法。方法:选择VP1基因作为检测目标,设计引物、探针,探针5′端用FAM标记,3′端标记MGB,建立重组质粒标准曲线,评价特异性、灵敏度、重复性;对本院收集的肾移植患者尿液标本进行检测。结果:本研究以BK病毒VP1基因中75 bp为靶基因,建立结合TaqMan-MGB的荧光PCR方法,灵敏度为10拷贝/μl,R2:0.999;批间和批内的重复性(CV%)均小于5%。102例临床标本中检测到10例阳性标本,阳性率为9.8%,上述结果与测序验证结果一致。结论:结果表明BK病毒TaqMan-MGB探针荧光PCR方法的特异性好、灵敏度高、操作简便,可特异、快速、灵敏地对临床标本的BK病毒进行定量检测,可用于早期诊断BK病毒感染和预防肾移植术后BK病毒感染造成的相关肾病等方面。

摘要：目的建立并应用检测儿童下呼吸道感染病人博卡病毒的荧光定量PCR方法。方法选择人博卡病毒的NS1基因作为目标基因,设计荧光定量PCR引物和检测探针,以重组质粒为标准品建立标准曲线,从而建立特异性检测人博卡病毒的荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价;应用该方法对下呼吸道感染患儿的痰或吸痰、咽拭子及血清标本进行定量检测。结果本研究以人博卡病毒NS1基因中85bp的特异性保守片段为目标基因建立荧光定量PCR检测方法,质粒标准曲线的相关系数为0.999,灵敏度可达到50拷贝;应用该方法对下呼吸道感染患儿的痰或吸痰、咽拭子和血清标本进行定量检测,在176例痰或吸痰标本中检测到7例阳性标本,阳性率达到3.98%(7/176),另64例咽拭子标本中未检测到阳性标本,总阳性率为2.92%(7/240),240例血清标本均未检测到阳性标本。结论建立的荧光定量PCR方法可以特异、快速、灵敏地对儿童下呼吸道感染的人博卡病毒进行定量检测。痰或吸痰标本较咽拭子或血清标本更适用于人博卡病毒感染的核酸检测。

摘要：目的建立一种快速、准确、特异和定量检测人细小病毒B19的实验检测方法。方法以B19病毒NS1基因为靶序列,设计并合成引物和Taqman探针,优化引物与探针比例,调整镁离子浓度,建立对细小病毒B19进行荧光定量检测的实验方法。同时利用荧光定量PCR技术检测本院收集的490例孕妇血清。结果引物与Taqman探针比例为1∶4,镁离子浓度为2.5mmol/L时,反应的本底最低,荧光信号最强。该方法的灵敏度为1.0×101拷贝,有较好的特异性和重复性。检测的490例临床孕妇血清标本,人细小病毒B19DNA阳性为44例,感染率为8.9%(44/490)。结论使用Taqman探针技术的荧光定量聚合酶链反应,能够准确快速定量检测血清中的人细小病毒B19。