摘要：目的:克隆血管内皮生长因子C(VascularEndothelialGrowthFactorC)功能片段的cDNA,构建人VEGF-C基因的真核表达载体,以便进一步研究VEGF-C在宫颈癌中表达的意义及在淋巴管生长及转移中的作用。方法:根据人VEGF-CcDNA序列,设计合成二对特异性引物,第一对5'端含有EcoRⅠ及第二对3'端含有XhoⅠ酶切位点。运用RT-PCR法克隆人MDA-MB231中的VEGF-CcDNA部分编码序列(CDS);经双酶切后将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),重组质粒在处于感受态的大肠杆菌DH5α中扩增,纯化。通过PCR和双酶切鉴定阳性重组子及进行基因序列的测定。结果:用RT-PCR克隆到VEGF-CcDNA部分CDS;PCR和双酶切鉴定阳性重组子,显示有人VEGF-CcDNA编码序列,基因序列测定显示重组质粒上插入的人VEGF-C序列正确。结论:从富含VEGF-C的人MDA-MB231细胞系中克隆得到的VEGF-C基因功能片段cDNA,成功构建了人真核表达载体pcDNA3.1(+)/VEGF-C。

摘要：目的通过RNA干扰技术抑制宫颈癌细胞VEGF-C表达,探讨干扰后VEGF-C、NF-κB、bcl-2基因的表达。方法根据人VEGF-C mRNA编码序列,设计RNA干扰的靶点,并用脂质体转染人宫颈癌HeLa细胞,通过RT-PCR法观察转染后肿瘤细胞VEGF-C、NF-κB、bcl-2基因的变化。结果转染siRNA 24h、48h可以使HeLa细胞VEGF-C mRNA含量降低,在24h降低80.63%±0.24%(P<0.001);在48h降低38.9%±0.85%(P<0.01);NF-κB mRNA含量也分别降低,在24h降低37.55±2.76%(P<0.05);在48h降低30.5%±3.82%(P=0.056);bcl-2mRNA含量同时分别降低,在24h降低76.95%±1.91%,(P<0.01);在48h降低64.11%±2.96%,(P<0.05))。结论脂质体介导的VEGF-C siRNA转染HeLa细胞后,可以有效抑制VEGF-C的表达;可能通过下调转录因子NF-κB,抑制抗凋亡基因bcl-2的表达。