摘要：根据GenBank中细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白(FABP)基因cDNA序列设计引物,并在起始密码子前加上Kozak序列(CCACC),提取细粒棘球蚴(内蒙株)的原头蚴总RNA,RT-PCR扩增目的基因。回收其纯化的产物克隆到pMD19-T载体后进行序列分析。克隆到的FABP基因cDNA序列长402bp,开放阅读框(ORF)编码133个氨基酸。FABP基因cDNA亚克隆到pcDNA3.1(+)中,构建核酸疫苗pcDNA3.1-FABP-NM,经测序验证,结果正确。

摘要：目的为确定细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白(FABP)基因的特性并为研究其免疫功能奠定基础。方法根据已报道的细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白的基因序列(AY024340和AF321119)设计引物,进行FABP基因扩增。结果成功克隆到细粒棘球蚴内蒙株FABP基因,扩增片段为482bp;序列比对结果显示,细粒棘球蚴内蒙株FABP基因与国内株FABP基因(GenBank登录号为AY024340)序列完全一致,同源性为100%;与国外株FABP基因(GenBank登录号为AF32I119)的同源性为99%。结论细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白有潜在的抗原表位位点,为研究该蛋白的免疫功能及构建FABP核酸疫苗奠定了基础。

摘要：根据猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)E2蛋白的序列设计并人工合成18条重叠多肽,与载体蛋白BSA偶联后,利用抗CSFV E2蛋白单克隆抗体SWmAb8筛选该蛋白上的B细胞表位;同时用12肽噬菌体随机肽库淘选E2单抗识别多肽序列。结果显示,多肽序列VSPTTLRTEV能被单抗SWmAb8识别;含SPTxLR基序的噬菌体能被单抗SWmAb8结合,且能被病毒抗原竞争性抑制。证实SPTxLR基序很可能是E2蛋白的线性表位之一,可诱导机体产生中和抗体。

摘要：为获得具有抗原性的口蹄疫病毒(FMDV)3D蛋白N端T细胞表位的重组表达蛋白,根据FMDV3D蛋白前115位氨基酸序列,设计优化并人工合成相应的核酸序列,将其克隆至pET-28a中,构建原核表达质粒pET28a-115,并将重组质粒转化至BL21(DE3)细胞。经IPTG诱导后,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-bolt鉴定,结果显示,在16kD处有一条明显的蛋白表达条带。对表达产物进行可溶性分析,结果表达蛋白50%为可溶性蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后获得了较高浓度和纯度的目的蛋白。研究结果表明,含FMDV 3D蛋白前115位氨基酸的重组蛋白在大肠杆菌中得到了高效可溶性表达,并具有较好的抗原活性,为开发口蹄疫诊断试剂和基因工程疫苗奠定了基础。

摘要：在猪IgA重链CH1-CH3区设计一对引物,用RT-PCR方法从地方杂交品种长白猪肠系膜淋巴结组织中扩增出预期大小的片断,插入pGEM-Teasy载体,测序并与约克夏猪、人及其他动物的IgA进行序列比较。随后,将该序列酶切后引入到pQE-30表达载体相应位点,转化JM109大肠杆菌,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE分析。结果显示,本研究克隆了猪IgA重链恒定区部分CH1亚区及完整的CH2-CH3亚区基因序列,全长822bp,编码274个氨基酸,该序列与GenBank上登录的约克夏猪参考序列核苷酸序列同源率为99.8%,有2处核苷酸变异,氨基酸序列的同源率为100%。但与人及其他动物显示从84%～51%不等的同源性;在大肠杆菌表达出约31ku的蛋白条带,表达量约占菌体总蛋白的32.3%。本试验为今后的IgA免疫功能研究及基因工程化检测试剂开发打下了基础。

摘要：克隆细粒棘球蚴EG95基因cDNA并构建核酸疫苗pcDNA3.1-EG95。根据GenBank中细粒棘球蚴EG95基因序列(AF134378)设计引物并在上游引物起始密码子前加上Kozak序列(CCACC),提取细粒棘球蚴总RNA,RT-PCR扩增目的基因EG95cDNA,扩增片段克隆到pcDNA3.1(+)中构建重组载体pcDNA3.1-EG95后测序。重组质粒pcDNA3.1-EG95采用脂质体法转染绵羊胎儿成纤维细胞并用G418筛选,RT-PCR检测稳定转染细胞中目的基因的转录。测序结果表明克隆的目的基因包含了471bp的完整ORF并与载体连接正确。RT-PCR检测表明EG95基因在稳定转染的绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录。成功构建pcDNA3.1-EG95核酸疫苗并可在绵羊胎儿成纤维细胞中转录目的基因,可进一步用于活体动物免疫研究。

摘要：在水利工程建设中采用"四新技术",达到了节约成本、加快进度、提高质量、加强安全等目的,但是盲目推崇和滥用"四新技术"可能会给工程建设带来非常严重的后果,必须充分认识新技术的优点和缺陷,有选择性的应用,采取切实有效的控制措施,才能体现新技术的优势,实现新技术的完善、发展和成熟。

摘要：实验设计从富含乳酸菌的样品中分离目标菌,通过多次划线传代,结合形态观察与革兰氏染色,获得纯培养物,接下来通过16sRNA基因序列与使用API 50 CH试剂盒进一步将目标菌鉴定到种.教学实践证明通过开展这一综合性实验,可以培养学生良好专业技能,有助于提高学生综合素质和创新思能力.

摘要：参考GenBank上H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计引物,PCR扩增NP基因,对其进行序列分析并构建分子进化树。将克隆的NP基因插入原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中进行诱导表达,对诱导表达的NP重组蛋白进行纯化、Western-Blot鉴定及免疫原性分析。结果表明,克隆的NP基因与GenBank上发表的另外2个河南AIV毒株亲缘关系较近,诱导表达的NP重组蛋白主要以可溶性形式存在,分子量约为70 kDa,并且能够与H5亚型AIV阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。