摘要：背景:在细胞获取、培养、移植等体外环境体系下,骨髓基质干细胞能否有效的应用于局部基因治疗尚不清楚。目的:课题创新性提出构建外源性hBMP-7基因真核表达载体,并期望可提高被转染的兔骨髓基质干细胞诱导成骨能力。设计、时间及地点:细胞-基因学体外观察,于2006-07/2007-07在哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心完成。材料:人健康新鲜胎盘组织由哈尔滨医科大学附属二院妇产科提供,产妇知情同意。健康雄性新西兰大耳白兔1只,由哈尔滨医科大学动物中心提供。方法:从人胎盘组织中克隆出hBMP-7基因,与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建重组pcDNA3.1-hBMP-7真核表达载体。从兔骨髓中分离培养骨髓基质干细胞,分为3组:pcDNA3.1-hBMP-7转染组、空载体pcDNA3.1转染组、未转染组。转染前1d取第2代骨髓基质干细胞5×106个,接种到60mm3含无抗生素培养基的培养皿中进行转染。主要观察指标:使用RT-PCR、免疫组织化学等方法检测hBMP-7在骨髓基质干细胞中的表达,检测各组细胞碱性磷酸酶、胶原、骨钙蛋白的合成情况。结果:转染72h后,pcDNA3.1-hBMP-7转染组于1.3kb处出现特异性条带,细胞胞浆有棕色的颗粒出现,另2组均呈阴性。pcDNA3.1-hBMP-7转染组骨髓基质干细胞碱性磷酸酶活性于转染后第2天显著增高,第8天达峰值,各时间点pcDNA3.1-hBMP-7转染组骨髓基质干细胞碱性磷酸酶活性、羟脯氨酸合成量、骨钙蛋白含量均明显高于其他2组(P<0.05或0.01)。结论:实验成功构建了pcDNA3.1-hBMP-7真核表达载体。结局证明了外源性hBMP-7基因可在兔骨髓基质干细胞中充分、高效表达,并且这种外源性hBMP-7基因具备促进兔骨髓基质干细胞向成骨细胞转化的能力。

摘要：背景 口服中药在慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）的治疗中应用广泛，但相关临床试验的结局指标尚未得到统一和规范。 目的 通过筛选已发表的以口服中药为AECOPD治疗措施的随机对照试验（RCT），总结其文献特征和选用的结局指标情况，为中医药治疗AECOPD临床试验设计和结局指标选择提供参考。 方法 计算机检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普网、中国生物医学文献数据库、PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane Library、***、中国临床试验注册中心，获取口服中药治疗AECOPD的RCT和临床试验注册方案，检索时限为2018年1月—2022年10月。由2位评价员独立筛选文献、提取资料后，采用定性分析的方法，对纳入研究的结局指标选择情况进行描述。 结果 纳入578篇文献，包含574篇已报告试验结果的RCT及4个临床试验注册方案。574篇RCT共纳入51 508例患者。88篇文献在纳入标准中限定了患者的疾病分级，361篇文献在纳入标准中限定了中医证型，6篇文献报告了盲法，6篇文献提及了随访。纳入文献共涉及4 030个结局指标，单篇文献结局指标数量范围为1~24个。按照结局指标的功能属性，将其归为8个指标域：中医症状/证候、症状/体征、理化检测、生活质量、远期预后、经济学评估、安全性评价、其他，报告率最高的指标域是理化检测，报告频次排名前5位的结局指标项目是：有效率（11.5%）、第1秒用力呼气容积（7.5%）、中医症状/证候评分（7.0%）、第1秒用力呼气容积/用力肺活量（6.8%）、用力肺活量（4.6%）。445篇文献报告了有效率的组成，报告率排名前5位的研究指标依次为症状（423篇）、体征（281篇）、中医证候评分（203篇）、实验室检查（89篇）、肺功能（71篇）。 结论 口服中药治疗AECOPD的RCT涉及的结局指标数量多、范围广，纳入的文献在不同程度上关注了口服中药对AECOPD患者的症状体征、理化检测指标、生活质量、远期预后、经济学评价和安全性结局等方面的影响。但结局指标的选择仍存在多方面的问题：结局指标主次不清；主要关注替代终点，对临床终点的关注不足；对卫生经济学指标关注不足；有效性参考来源不一、判断标准不一。研究者可参考已发表的核心指标集，合理设计结局指标，以提高中医药临床研究的质量。