摘要：目的构建结核分枝杆菌TB10.4的原核重组表达体系并表达TB10.4,分析其反应原性。方法 GenBank报道的结核分枝杆菌标准株H37Rv TB10.4基因序列设计并合成引物,从H37Rv基因组DNA为模板PCR扩增TB10.4基因片段,克隆至pMD-18T载体后转化大肠埃希菌JM109,筛选和鉴定阳性克隆,并进行测序分析。将TB 10.4基因插入原核表达载体pET-28a后转化大肠埃希菌*** DH5ɑ,PCR和双酶切鉴定阳性的重组子转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达TB 10.4蛋白。冰浴超声裂解重组菌,His-bindTM柱层析纯化TB10.4蛋白,Western blot分析其反应原性,ELISA评价其诊断结核病的价值。结果 PCR扩增和克隆获得TB10.4基因片段,大小约300bp,与GenBank中报道的序列一致。将TB10.4基因片段插入原核表达载体,构建TB10.4蛋白重组表达体系,金属螯合层析获得分子质量单位约为10.4ku的TB10.4。Western blot证实TB10.4蛋白可被结核患者血清特异识别。以重组TB10.4为抗原采用ELISA诊断结核病的灵敏度为88.5%,特异度为97.3%,阳性预测值93.8%,阴性预测值94.8%,诊断效率94.5%。结论成功构建了TB10.4蛋白的重组表达体系,表达的TB10.4蛋白具有反应原性,可用于结核病的免疫诊断。

摘要：目的:探讨结核分枝杆菌检测新靶标CYP141基因对结核感染的辅助诊断价值。方法:配对设计研究选取2019年3月~2019年10月湖南省结核病防治所收治的结核患者的临床菌株91例和疑似结核患者的痰标本122例,分别使用结核分枝杆菌CYP141靶基因和IS6110靶基因进行直接PCR扩增,琼脂糖电泳观察结果。结果:在临床菌株的检测中,CYP141靶基因的灵敏度为100%,IS6110靶基因的灵敏度为98.9%,CYP141靶基因敏感性稍高于IS6110靶基因;而在临床痰标本的检测中,CYP141靶基因的灵敏度为42.9%,特异性为100%。IS6110靶基因的灵敏度为60.3%,特异性为100%。IS6110的灵敏度高于CYP141。两者特异性一致,均为100%。结论:CYP141靶基因是结核分枝杆菌检测的一个理想靶标,在结核分枝杆菌的分子诊断方面具有良好的应用价值。

摘要：我国长期以来,高速公路工程概算的编制是基于定额体系进行编制,而定额体系的确定具有滞后性、偏差性的缺点,导致所编制的高速公路工程概算存在偏差,而越来越大的投资规模和承包模式,对于投资资金的管控也提出了更高的要求。为解决该问题,经过文献分析与方法研究,基于XGBoost算法模型与造价指标体系对高速公路工程概算进行了预测模型的创建,分析了XGBoost算法模型与指标体系的优势。以大量筛选指标和项目概算信息为样本库,使用网格搜索和交叉验证的方式优化了XGBoost算法模型,调整了模型相关的参数组合,优化了XGBoost算法模型的参数设置。以RMSE,MAE,R2这3个常用预测精度评价指标组合评价作为评价体系,对模型的预测从精准性、稳定性和偏差性上进行了评价。最终提出了造价预测的新方案,并对所创建的XGBoost算法预测模型进行了抽样验证,展现该算法模型在高速公路工程概算预测过程中的预测能力,对推广造价指标体系、提高高速公路工程造价预测的精度具有一定的促进作用。同时也对造价指标的影响因素进行了详细分析,以特征重要性为指标进行分析与探究,探究对于我国高速公路造价指标的重要影响因素,探究影响因素与造价指标之间的潜在关系,为投资方和设计单位提供概算编制的新的辅助参考指标和研究方向。