摘要：目的构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的第10染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,并在转染人子宫腺肌病(adenomyosis,AM)细胞后筛选最优稳转株。方法设计合成3条特异性针对人PTEN基因的shRNA序列,构建到pHBLV-U6-MCS-CMV-ZsGreen-PGK-PURO载体中,测序鉴定载体构建情况,进而包装病毒并检测滴度。筛选出最优感染复数(multiplicity of infection,MOI)、嘌呤霉素杀灭浓度后,用慢病毒液转染AM细胞,以嘌呤霉素药筛建立PTEN敲低的稳定细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测转染后细胞内PTEN mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测PTEN蛋白表达水平,以检验转染效率并筛选出干扰效率最佳的shRNA序列。结果成功构建了3个PTEN shRNA慢病毒载体,包装后以MOI为50转染AM细胞,荧光显微镜观察绿色荧光表达明显,嘌呤霉素持续药筛建立了PTEN敲低的稳定细胞株,以PTEN shRNA3慢病毒载体的干扰效率最佳(92.98%)。结论成功构建了PTEN shRNA慢病毒载体,并在体外有效转染了AM细胞,建立了PTEN敲低的稳定细胞株。

摘要：在利用原有方法进行电网供应链稳态管控时,识别的风险点不够全面,导致无法进行电网供应链风险评估,且评价标准在76.23%~92.23%的范围内存在供应链节点稳定率较低的问题,因此本文提出一种基于模糊综合评价模型的电网供应链稳态管控方法。通过对电网供应链的结构分析,结合德尔菲法和流程分析法,全面识别电网供应链运行流程中的显性风险与隐性风险。构建电网供应链风险评估模型,并基于模糊综合评价模型构造评估矩阵对电网供应链风险评估模型中的风险因素进行评估。通过对比实验验证,设计方法使评价标准在76.23%~92.23%范围内的供应链节点稳定率高于原有方法,提高了电网供应链稳态管控的稳定性。