摘要：目的 应用基于聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）的基因定点诱变技术（sitedirected mutagenesis,SDM）制备s、Oka血型等位基因检测对照品.用多重聚合酶链反应（multiplex PCR）技术建立3种血型Fy2、s和Ok2的基因分型方法,以了解这3种血型在中国随机献血者中的多态性分布状况.方法 采用基于PCR的基因定点诱变技术对s和Oka血型等位基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点构建了含有突变SNP位点（GYPB基因cDNA 153位C/T突变和BSG基因cDNA 274位G/A突变）的标准质粒,作为s和Oka血型等位基因检测的对照品.同时针对血型抗原Fya、s和Oka等位基因的SNP位点设计序列特异性（sequence specific primer,SSP）引物,构建多重PCR体系,对438份随机献血者样本进行Fya、s和Oka血型抗原的基因筛选.结果 成功应用定点诱变技术完成了s和Oka基因检测中等位基因对照品的制备,并建立了可同时检测Fya、s和Oka血型的多重PCR体系,438份随机献血者样本中共检出2例Fy（a-）样本,未检出s-和Ok（a-）样本.结论 基于PCR的基因定点诱变技术能够得到难以获得的血型基因检测等位基因对照品,用于验证基因分型方法.本实验建立的多重PCR体系是一种有效的进行Fya、s和Oka血型基因检测的方法.

摘要：目的建立可同时检测低频血型抗原等位基因Fyb和S,并且可进行多个标本混合检测的多重PCR基因分型方法。方法针对血型抗原Fyb和S等位基因的单核苷酸多态性(SNP)位点分别设计序列特异性引物,建立稳定的多重PCR体系。通过优化引物设计及PCR反应条件,提高多重PCR反应的灵敏度,使其可同时检测5份DNA标本。应用多重PCR体系,以每5份标本混和检测的方式,对4490份随机献血者标本进行Fyb和S血型抗原基因分型。通过单独的PCR-SSP验证方法,分别检测多重PCR中阳性标本的高频等位基因Fya或s,从而获得稀有血型表型Fy(a-b+)或S+s-。

摘要：目的建立可同时检测血型抗原Dib、k、Jsbl910、Jsb2019的一套稳定的基因分型方法，通过筛选获得所检测人群的稀有血型数据，可扩大中国稀有血型资料库。方法应用基于PCR的基因定点诱变技术制备Dib、k、Jsbl910、Jsb2019血型等位基因检测对照品。分别针对血型抗原Dib、k、Jsbl910、Jsb2019等位基因的单核苷酸多态性位点设计序列特异性引物，通过优化PCR条件建立多重PCR体系，并对4190份随机献血者样本进行Dib、k、Jsbl910、Jsb2019血型抗原基因分型。结果成功制备出Dib、k、Jsbl910、Jsb2019基因检测对照品，并成功构建检测血型抗原Dib、k、Jsbl910、Jsb2019的多重PCR体系，所建立的多重PCR体系具有良好的重复性和稳定性，4190份随机献血者样本中共检出2例Di（b-）样本，未检出k-和Js（b-）样本。结论多重PCR具有快捷、高通量且成本低的优点，可用于筛选稀有血型。获得的稀有血型可存入稀有血型数据库，为稀有血型患者及长期输血患者提供相配合的血液，减少输血不良反应的发生。