摘要：目的:建立双重实时荧光PCR方法用于流感病毒检测,实现对新甲型H1N1流感病毒,H1和H3亚型季节性流感病毒,H5和H9亚型禽流感病毒的亚型区分。方法:根据GenBank公布的基因序列,针对M基因保守区设计引物和探针,用于流感病毒检测和定量;针对HA基因设计引物和探针,用于病毒分型。建立和优化双重实时荧光PCR反应体系,进行敏感度和特异性评价,同时对32份已知亚型的流感病毒样本进行检测,验证所建方法的实用性。结果:基于M基因的实时荧光PCR方法定量范围为5×101到5×108个目的拷贝。经优化的双重实时荧光PCR方法对不同亚型流感病毒的检测灵敏度在50～500拷贝之间,各亚型之间没有交叉反应。建立的方法能够检测出本研究涉及的所有流感病毒标本,分型准确率达到96.9%。结论:建立的双重实时荧光PCR方法具有敏感度高,特异性好等优点,实现对流感病毒样本准确分型,适用于流感的鉴别诊断及病毒载量测定。

摘要：microRNA(miRNA)作为一种重要的基因表达调控分子,在宿主与病毒相互作用时发挥重要作用。研究发现,宿主感染流感病毒后miRNA表达发生改变,多种miRNA影响流感病毒复制和宿主的抗病毒反应,这类miRNA及其靶点有望成为基因药物和减毒活疫苗研发的重要突破口。除此之外,植物来源的miRNA和主动设计的人工miRNA也体现出抗流感作用。本文就miRNA在抗流感病毒方面的研究进展做一综述。

摘要：目的:建立环介导等温扩增(LAMP)方法用于H9亚型流感病毒基因的检测,为基层实验室提供简便快速的检测方法。方法:根据GenBank中公布的H9亚型流感病毒血凝素基因序列,选择保守区域应用在线软件PrimerExplorer V4设计LAMP引物。以克隆有H9亚型流感病毒血凝素基因的阳性质粒为模板,建立和优化LAMP检测方法,并进行灵敏度、特异性评价和病毒检测。结果:LAMP检测方法对H9亚型流感病毒基因的检出灵敏度达到5个拷贝,比普通PCR方法高出2个数量级,对H1、H3、H5亚型流感病毒不产生非特异性扩增,显示出良好的特异性。结论:建立的LAMP检测方法能快速、敏感、特异地检测H9亚型病毒,适合在基层实验室推广使用。

摘要：目的获得来源于浙江地区鸡组织中的鸡贫血病毒（CAV）筇基因并分析其变异情况。方法根据GenBank登录的vp3序列设计特异引物，利用PCR方法从鸡组织中获得7个CAV的硪，基因克隆，将其克隆到载体进行测序。结果40份鸡血清中共检出CAV阳性16份，阳性率40．0％。序列测定结果表明，叼妇基因长366bp，编码121个氨基酸，与GenBank登录的其他毒株目妒基因的核苷酸序列同源性为97．O％。100．0％，氨基酸序列同源性为95．0％-100．0％。结论通过PCR方法扩增获得了CAVvp3基因，w3基因及VP3蛋白总体上非常保守。