摘要：目的:利用RNA干扰(RNAi)技术,以HER-2为靶基因,设计构建重组表达载体,并进行测序鉴定.方法:设计具有短发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pGPU6/ GFP/Neo中构建重组表达载体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,并进行序列测定.再转染人大肠癌HT29细胞,进行荧光摄像和G418抗性筛选.结果:将合成的DNA序列退火后克隆到载体上,经酶切和测序鉴定确实为所需序列.结论:HER-2靶向RNA干扰重组表达载体的构建成功,并可以进行稳定筛选.

摘要：目的研究一氧化氮合酶(NOS)反义核酸(ASODN)对脊髓损伤后NOS表达、细胞凋亡、信号转导通路的影响。方法设计并合成诱导型NOS反义寡脱氧核苷酸(ASODN-iNOS)及诱导型NOS无义寡脱氧核苷酸(NSODN-iNOS),微量注入大鼠蛛网膜下腔并制备成脊髓压迫伤动物模型。伤后6 h分别用RT-PCR检测iNOS mRNA表达及用Western blotting检测组织中磷酸化丝裂原激活蛋白激酶(p-p38 MAPK)的变化,用双标染色流式细胞术检测伤后72 h细胞凋亡情况。损伤对照组鞘内注射不含核酸的溶液成分。结果脊髓损伤后组织中存在iNOS的表达和p-p38 MAPK变化;损伤后局部组织中存在明显的细胞凋亡;ASODN-iNOS可以抑制iNOS的表达,并可以显著抑制损伤后p-p38 MAPK的表达和细胞凋亡的发生,与损伤对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论ASODN-iNOS可以抑制脊髓损伤后iNOS的表达和细胞凋亡,ASODN的这种作用可能与p-p38 MAPK信号转导通路有关。

摘要：目的:通过RNAi技术建立DAL-1稳定抑制的NSCLC细胞实验模型,并对DAL-1在NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用进行研究。方法:构建靶向DAL-1的shRNA表达载体转染NSCLC细胞株,筛选出阳性克隆,在mRNA和蛋白质水平鉴定其抑制率,最终得到DAL-1稳定抑制的细胞株;用Transwell迁移和侵袭模型比较实验和对照组细胞在迁移和侵袭能力方面的差异;用MTT法比较实验和对照组细胞在增殖能力方面的差异。结果:自行构建的pGPU6/GFP/Neo-DAL-1shRNA表达载体经双酶切鉴定和测序鉴定序列及插入方向正确,其中pGPU6/GFP/Neo-DAL-1-T4表达载体在mRNA和蛋白质水平能有效抑制DAL-1的表达,抑制率分别为(87.41±1.994)%和(82.73±2.147)%。与对照组细胞比较,DAL-1稳定抑制的实验组细胞迁移和侵袭能力(P=0.000)和增殖能力显著增强(P=0.000)。结论:成功设计并构建了靶向DAL-1的shRNA表达载体,建立了DAL-1稳定抑制的NSCLC细胞株,为进一步研究DAL-1在NSCLC细胞中的作用提供了实验模型。

摘要：目的构建let-7d真核表达载体,研究let-7d对卵巢癌细胞生物学行为及蛋白表达的影响。方法根据let-7d序列设计合成microRNA片段,定向克隆到pcDNATM6.2GW/EmGFPmiR真核表达载体上,运用基因转染技术将其导入卵巢癌IGROV1细胞中,使let-7d基因过表达,以实时荧光定量PCR验证let-7d及高迁移率A2(HMGA2)基因的表达,并用Western blotting检测相关蛋白HMGA2的差异表达。以MTT绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡率,分析let-7d对IGROV1细胞增殖生长的影响。结果成功构建针对靶向let-7d的表达质粒,将表达质粒转染人卵巢癌IGROV1细胞后,明显下调HMGA2的表达水平,而下调ras蛋白的作用较弱,没有前者明显。细胞表型研究显示,抑制HMGA2表达可能改变该细胞的恶性表型,表现在细胞增殖能力明显下降,自发凋亡率明显增加等。结论 Let-7d通过对HMGA2的调控,在改变卵巢癌IGROV1细胞恶性表型方面可能起重要作用。

摘要：目的:建立DAL-1稳定抑制的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞实验模型.方法:构建靶向DAL-1的shRNA表达载体转染NSCLC细胞株,筛选出阳性克隆,在mRNA和蛋白质水平鉴定其抑制效率,最终得到DAL-1稳定抑制的细胞株.结果:通过双酶切鉴定和测序鉴定构建的shRNA表达载体序列正确,T4表达载体在mRNA和蛋白质水平能有效抑制DAL-1的表达,抑制率分别为(87.4±2.0)%和(82.7±2.1)%.结论:成功设计并构建了靶向DAL-1的shRNA表达载体,建立了DAL-1稳定抑制的NSCLC细胞株,为进一步研究DAL-1在NSCLC细胞中的作用提供了实验模型.

摘要：在Offner展宽器的设计研究中，对曲面镜曲率半径的误差研究非常重要，它直接影响输出脉冲的质量。因此有必要分析Offner展宽器中曲面镜曲率半径的误差对输出脉冲对比度的影响。参考Offner展宽器的光线追迹模型，建立了Offner展宽器中曲面镜曲率半径存在误差时的光线追迹模型；根据建立的模型，详细分析了曲面镜曲率半径的误差对输出脉冲质量的影响；发现在目前曲面镜曲率半径的加工误差在0．2％～0．5％的情况下，完全可以满足神光II拍瓦激光装置中对展宽器的要求；同时发现如果曲面镜曲率半径存在误差时，应该尽量使两曲面镜之间的距离保持为凹面反射镜曲率半径的一半，而不是使两曲面镜保持同心。

摘要：基于衍射理论和神光Ⅱ升级激光装置的光路结构及光学元件波前像差,建立了激光装置光束波前像差传输计算模型,用以获取在实验中难以取得,但对激光系统设计和安全运行非常重要的变形镜校正面型、放大器动态波前像差、空间滤波器波前像差和焦斑形态等过程数据。利用该模型对激光装置常规运行时的静态传输、变形镜加压静态传输和大能量发射3种状态下的波前传输进行理论分析,计算结果与实验测量相一致,并在此基础上对变形镜未加压大能量发射波前传输进行计算。计算模型可用于指导相关器件的设计,优化激光运行控制模式,有利于提高激光装置输出波前质量。

摘要：目的　克隆人肝癌细胞系HHCC中的肿瘤相关基因MAGE 1的全长cDNA。方法　根据GenBank中MAGE 1基因编码区 ,设计PCR引物 ,用RT PCR方法 ,从人肝癌细胞系HHCC中获得MAGE 1全长cDNA ,双酶切后连接入质粒 pUC19中 ,转化入大肠杆菌DH5α。挑选阳性克隆提取质粒 ,进行DNA序列分析 ,并将测得的核苷酸序列与GenBank中的DNA序列进行BLAST同源性分析。结果　获得MAGE 1全长cDNA、MAGE 6基因 4 6 3bp片段 ,以及 1个与MAGE 6基因编码区有 93%同源性的片段 ,可能为MAGE家族中的新成员。结论　人肝癌细胞系HHCC可表达多种MAGE基因 ,可能有新的MAGE基因出现 ,为研究MAGE基因在HCC中的表达模式及其在HCC免疫治疗中的靶点提供了新的资料。

摘要：目的:探讨EGFR/HER2基因沉默对非小细胞肺癌细胞株EGFR酪氨酸激酶信号转导通路的交互影响及其与细胞增殖、凋亡和周期改变的关系。方法:设计并合成EGFR、HER2及EGFR/HER2共干扰序列,构建含干扰序列的载体,进行瞬时转染;应用实时荧光定量、蛋白印迹法检测基因沉默效果;用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞仪检测基因沉默后生物学特性改变;蛋白印迹法检测EGFR下游信号通路蛋白Akt、p-Akt、p-Erk1/2、p-p38表达水平变化;采用SPSS13.0软件分析结果。结果:在SPC-A-1细胞系中,EGFR干扰组、HER2干扰组、EGFR联合HER2干扰组和EGFR-HER2共干扰组体外细胞增殖率均有下降趋势;除EGFR干扰外,其余各组均可诱发凋亡;各组的细胞周期G1期和S期细胞比例有显著改变;基因沉默效果检测显示EGFR和HER2基因蛋白水平被下调。下游信号通路蛋白检测示EGFR下游信号通路蛋白Akt、p-Akt、p-Erk1/2、p-p38表达水平和细胞增殖、凋亡以及细胞周期改变之间未发现明显相关规律。结论:单纯EGFR干扰SPC-A-1细胞不能诱发显著凋亡,HER2和EGFR/HER2基因共沉默后诱发的人肺腺癌SPC-A-1细胞凋亡比阴性对照显著增加。EGFR/HER2基因沉默后诱发的细胞增殖、凋亡和细胞周期改变与EGFR家族下游信号通路蛋白之间未发现显著相关关系。

摘要：展宽系统是高能拍瓦激光装置中的重要组成部分。它的设计好坏直接影响输出脉冲的质量。综述了国内外著名的高能拍瓦激光装置中所用展宽系统的结构及其相应的参数,并加以比较分析和讨论。