摘要：目的:探讨活化T细胞核因子5(nuclear factor 5 of activated T cells, NFAT5)对人胃癌MGC803细胞增殖及凋亡能力的影响及其可能的机制。方法:设计并合成3条靶向NFAT5基因的siRNA(siRNA2567、siRNA2714和siRNA4562)及1条与NFAT5基因无同源性的阴性对照siRNA(NC-siRNA),脂质体介导转染人胃癌MGC803细胞后,采用Real-time PCR检测分析细胞中NFAT5 mRNA表达水平的变化,进而筛选出有效抑制NFAT5基因表达的siRNA(NFAT5-siRNA)。NFAT5-siRNA转染MGC803细胞48 h后,进一步采用Real-time PCR和Western blotting验证并检测细胞中NFAT5和S100A4 mRNA及蛋白表达水平的变化,流式细胞术和CCK-8法分析抑制NFAT5表达对细胞增殖及凋亡的影响。结果:转染siRNA2567对NFAT5 mRNA的表达抑制最为明显(P<0.01),siRNA2567被验证为NFAT5-siRNA。转染NFAT5-siRNA 48 h后,NFAT5和S100A4 m RNA及蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);与NC-siRNA组相比较,NFAT5-siRNA组MGC803细胞的增殖率在72 h和96 h均显著降低(P<0.01);NFAT5基因沉默48 h后,MGC803细胞的凋亡率由(2.7±0.2)%上升至(7.9±0.2)%(P<0.01)。结论:NFAT5-siRNA能有效沉默人胃癌MGC803细胞中NFAT5基因表达,在抑制细胞增殖率的同时能够有效促进细胞凋亡,该作用可能通过调控S100A4表达实现。

摘要：目的:探讨靶向TLR4基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的影响。方法:设计并合成针对TLR4基因的3条siRNA(siRNA722、siRNA1673和siRNA2560)及1条与TLR4基因无同源性的阴性对照siRNA,采用Real-time PCR和Western blotting方法测定干扰后A549细胞中TLR4 mRNA及蛋白的表达水平,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA并确定最佳转染条件。TLR4特异性siRNA(TLR4-siRNA)转染A549细胞后,采用CCK-8法和Transwell小室法分别检测沉默TLR4对A549细胞增殖和侵袭能力的影响。结果:与阴性对照相比,siRNA1673在转染48 h后对TLR4 mRNA和蛋白表达的抑制最为明显[(0.45±0.03)vs(0.83±0.02),(0.23±0.06)vs(0.98±0.09);均P<0.01]。TLR4-siRNA转染72 h后A549细胞增殖活性显著下降[(0.77±0.01)vs(0.98±0.11)、(0.93±0.04),P<0.01];转染48 h后,TLR4-siRNA组A549细胞的侵袭细胞数明显少于阴性对照组[(23.60±2.88)vs(59.80±5.54)个,P<0.01]。结论:TLR4-siRNA能够沉默A549细胞中TLR4基因表达,抑制A549细胞的增殖和侵袭能力,TLR4可能成为肺癌基因治疗的候选靶点。

摘要：目的:探讨靶向生长分化因子15(growth differentiation factor 15,GDF15)基因siRNA对人肺腺癌SPCA1细胞增殖和迁移的影响。方法:根据基因数据库(Gen Bank)设计并合成3条人GDF15基因siRNA(GDF15-siRNA161、GDF15-siRNA290和GDF15-siRNA860)和阴性对照NC-siRNA序列,采用qPCR法测定转染不同GDF15-siRNA的SPCA1细胞中GDF15 mRNA表达水平,筛选有效抑制GDF15基因表达的siRNA。CCK-8法和划痕实验分别检测转染有效GDF15-siRNA和NC-siRNA的SPCA1细胞增殖和迁移能力。结果:3条GDF15-siRNA对SPCA1细胞GDF15 mRNA表达均有明显抑制(P<0.01),其中GDF15-siRNA161抑制最为明显。和转染NC-siRNA的SPCA1细胞相比,转染GDF15-siRNA161的SPCA1细胞增殖明显减慢[(0.46±0.03)vs(0.52±0.01),P<0.01],转染GDF15-siRNA161的SPCA1细胞迁移速度明显低于转染NC-siRNA的SPCA1细胞(P<0.01)。结论:有效沉默人肺腺癌SPCA1细胞GDF15基因表达能抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移,GDF15可能成为人肺腺癌基因治疗的候选靶点。

摘要：以"人参补气摄血作用"综合设计性实验为例,就教学模式,教学过程,形成性评价与反馈和教学体会等几方面展开讨论与总结。这种新型模式实验教学,不仅极大地锻炼学生自主学习能力,增强实验基本操作能力及科研创新能力,同时也促进教师不断提高自身的专业能力及实验技能。期待为中医院校如何结合自身特点开展《基础医学实验基本技能》实验教学的改革探索新的道路。