摘要：目的　体外扩增弓形虫RH株信号转导蛋白 14 3 3 (Toxo 14 3 3 )基因编码序列 ,构建原核表达质粒 ,并表达Toxo 14 3 3。　方法　收集、纯化弓形虫RH株速殖子 ,提取RNA ,在设计合成的引物中引入EcoRI和XhoI酶切位点。应用RT PCR扩增Toxo 14 3 3基因片段 ,插入原核表达质粒 pET2 8a中 ,重组子双酶切、PCR和测序鉴定 ,转化大肠杆菌BL2 1并以异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。　 结果　从弓形虫RH株RNA中扩增出 80 3bp的Toxo14 3 3基因片段 ,构建重组质粒 pET2 8a/14 3 3 ;IPTG诱导 ,SDS PAGE显示表达产物的大小约 3 0 .7kDa ,Western印迹鉴定为Toxo 14 3 3。　结论　成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了 14 3 3基因 ,构建了 pET2 8a/Toxo 14 3 3重组质粒 ,并获得高效表达。

摘要：目的　探讨重组弓形虫信号转导蛋白14- 3- 3(Toxo14- 3- 3)在弓形虫病免疫诊断中的价值。方法　根据弓形虫Beverly株猫肠上皮细胞增殖阶段的14- 3 -3编码基因,设计合成引物,自RH株速殖子基因组克隆Toxo14- 3 -3的ORF,克隆pET 28a质粒,转化大肠杆菌,获得表达产物并纯化融合蛋白,以此抗原包被反应板进行ELISA检测,并与粗制抗原及市售试剂进行比较。结果　对400份血清标本的平行检测,Toxo14 -3 -3抗原、粗制抗原和市售试剂盒的阳性率分别为2 5%、3 0%和3 .25%,三者之间差异无显著性(P>0 .05);三者之间的符合率为99 0%、98.8%和99 .0%,差异无显著性(P>0. 05 )。结论　重组Toxo14 -3- 3抗原检测弓形虫血清抗体具有潜在价值。

摘要：目的构建并鉴定刚地弓形虫RH株巨噬细胞迁移抑制因子(Tgmif)基因敲除虫株。方法设计刚地弓形虫RH株Tgmif的单向导RNA(sgRNA)和点突变引物,将pSAG1::Cas9-U6::sgUPRT质粒定点突变为针对Tgmif基因的pSAG1::Cas9-U6::sg Tgmif质粒。构建含有Tgmif上游1001 bp(Tgmif-up)、二氢叶酸还原酶-胸苷酸合成酶基因(dhfr-ts)和Tgmif下游1011 bp(Tgmif-down)等3个片段的Tgmif供体质粒,从Tgmif供体质粒PCR扩增获得Tgmif供体DNA。将pSAG1::Cas9-U6::sg Tgmif质粒和Tgmif供体DNA混合后电击转染野生型刚地弓形虫RH株(RH_(WT))速殖子,用乙胺嘧啶培养7 d,筛选获得稳定表达乙胺嘧啶抗性的虫株并进行单克隆筛选,PCR扩增dhfr-ts上、下游同源臂和Tgmif鉴定Tgmif基因敲除单克隆株(RH_(ΔTgmif))。提取RH_(ΔTgmif)和RH_(WT)株虫体蛋白,蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析TgMIF蛋白的表达情况。RH_(ΔTgmif)在人包皮成纤维(HFF)细胞中传代10代,吉氏染色,镜检计数100个HFF中速殖子数,评估RH_(ΔTgmif)在体外培养HFF细胞中的增殖能力,以RH_(WT)为对照。将20只BABL/c小鼠随机分为RH_(WT)组和RH_(ΔTgmif)组(10只/组),各组分别腹腔注射RH_(WT)或RH_(ΔTgmif)株速殖子(1000个/鼠),记录小鼠生存情况。弓形虫增殖能力的比较采用独立样本t检验,小鼠生存率的比较采用Log Rank检验。结果PCR检测结果显示,含Tgmif-up、dhfr-ts和Tgmif-down等3个片段的Tgmif供体DNA片段长5049 bp,与预期相符;RH_(ΔTgmif)株分别扩增出1387、1524 bp的dhfr-ts上、下游同源臂条带,RH_(WT)株无相应条带;RH_(WT)株扩增出1837 bp的Tgmif条带,RH_(ΔTgmif)株无相应条带。Western blotting分析结果显示,RH_(WT)株在相对分子质量(M_(r))12500处出现1条蛋白条带,RH_(ΔTgmif)株无相应的蛋白条带。吉氏染色镜检结果显示,100个HFF中RH_(ΔTgmif)株速殖子为(2986±69.20)个,高于RH_(WT)株的(2067±51.08)个(t=18.50,P<0.01)。体内毒力试验结果显示,RH_(WT)组小鼠在第7天出现死亡,在第9天全部死亡;RH_(ΔTgmif)组小鼠在第5天出现死亡,第7天全部死亡,两组之间的差异有统计学意义(χ^(2)=17.45,P<0.01)。结论成功构建Tgmif基因敲除弓形虫虫株RH_(ΔTgmif),RH_(ΔTgmif)株的毒力比RH_(WT)株强。

摘要：目的　体外扩增弓形虫 RH株膜表面抗原 SAG1编码基因 ,构建原核表达质粒 ,并表达 SAG1编码基因序列。方法　收集、纯化 RH株速殖子 ,提取 RNA,据已知的 SAG1基因序列 ,在设计合成的 1对引物中引入 Eco RI和 Hind 酶切位点。应用 RT-PCR技术 ,扩增 SAG1基因片段 ,插入原核表达质粒 p ET2 8a中 ,转化大肠杆菌 BL2 1 感受态细胞 ,重组子经 Eco RI和 Hind 双酶切、PCR鉴定 ,转化宿主菌 BL2 1 ,并以 IPTG诱导表达。结果　从弓形虫 RH株 RNA中扩增出 10 1 1 bp的 SAG1基因片段 ,构建重组质粒 p ET2 8a/ SAG1 ,酶切和 PCR鉴定产物大小均与预期值相符 ;IPTG诱导 ,SDS-PAGE显示表达产物的大小约 3 4.8k D。结论　成功地从弓形虫 RH株 RNA中获取 SAG1基因 ,构建了 p ET2 8a/ SAG1重组质粒并获得了高效表达 。

摘要：介绍了基于开放网格服务体系结构(OGSA)的山东大学网格计费系统-—SDUGAS,该系统主要致力于解决网格环境下异构资源使用的记账和计费问题,为用户和管理员提供良好的网格服务,在此基础上大力提高网格资源的利用率。山东大学网格计费系统的设计和实现以OGSA为标准,充分考虑了网格环境下系统的可扩展性和可移植性,强调在网格环境下数据描述的一致性和系统集成安装的易操作性。介绍了SDUGAS的体系结构、实现的基本原理和方法、资源信息的采集过程、资源预订、资源的价格策略以及网格银行的设计与实现等内容,给出了一个SDUGAS记账和计费过程的简单实例。

摘要：Needs analysis as the central force of EAP has received insufficient practice, resulting in dissatisfactory pedagogy. This study proposes a framework of CEAPNA （comprehensive EAP needs analysis）, and illustrates how the framework helps to shape learning-centered EAP pedagogy. The CEAPNA survey covered 452 undergraduates and 83 faculty members from science and engineering departments, and was triangulated with the researchers＇ retrospection of seven years of pedagogical practice. Major findings in the study suggest multiple sources as a must in a comprehensive and accurate analysis of EAP learner needs. In the meantime, the specificity of learner needs addresses EAP practitioners＇ endeavors to specify these needs in various dimensions, so as to negotiate a satisfactory balance between language, cognition and affect in EAP pedagogy. Due to realistic constraints in specifying and balancing the needs, this paper wishes to oblige with a conceptual interpretation as well as a pedagogical retrospection.

摘要：简述了沉降观测网设计原则、标志埋设的要点，以及沉降观测中要注意的问题，给出了蒙达公司二期工程沉降观测点的布置图，通过实例说明了沉降观测在施工中的应用，并得出了工程的沉降观测结果。

摘要：针对现行财务报表审计制度中存在的固有缺陷,乔斯华·罗恩教授设计了财务报表保险制度。在其基础上,本文分析了财务报表保险制度不够完善的方面,设计出财务报表和审计报告双重保险制度,以更好地保证会计信息的高质量和审计的独立性。

摘要：本文由美国批判性思维运动的开拓者罗伯特·恩尼斯教授撰写,旨在为批判性思维测试的设计和评判提供指导作用。笔者首先详细阐述批判性思维的定义,并指出当前批判性思维测试普遍缺乏全面性,在此基础上,论述了批判性思维测试的目的及其误区,并列举了已公开发表的一些批判性思维试题,最后为自行设计批判性思维测试提供了3种方法,即带有书面论证的多项选择测试、批判性思维论文测试和效能测试。批判性思维是理性和创造性的核心能力,被普遍确立为教育特别是高等教育的目标之一。本文对我们现今从事批判性思维教育或是测试批判性思维能力具有重要意义。