摘要：利用正交实验设计L25(56)对东亚砂藓(Racomitrium japonicum)DDRT-PCR反应体系的6因素(Mg2+、dNTP、锚定引物、随机引物、模板DNA、Taq酶)在5个水平上进行优化实验。结果筛选出各反应因素的最佳体系(20μL)为:Mg2+2.25mmol/L、dNTP0.4mmol/L、锚定引物1.0μmol/L、随机引物0.7μmol/L、模板DNA1.6μL、Taq酶2.5U。对东亚砂藓DDRT-PCR最佳反应体系进行梯度PCR引物退火温度筛选,得到的最佳退火温度为45.4℃。该优化体系的建立,为进一步进行东亚砂藓抗旱基因的筛选与克隆等一系列分子研究提供了重要参考依据。

摘要：目的探讨叶酸在N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)致哈萨克族食管上皮细胞APE1、MGMT基因mRNA及蛋白表达中的作用。方法采用3×3析因设计将体外培养的哈萨克族食管上皮细胞暴露于不同浓度叶酸(0.00、0.40和0.80μg/ml)和MNNG(0.00、0.75和1.50μg/ml)的培养液中作用48、72和96 h后,采用RT-PCR法检测APE1、MGMT基因mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测APE1、MGMT基因蛋白表达水平。结果随着叶酸浓度降低和MNNG浓度增加,APE1基因的mRNA及蛋白表达水平随着损伤的增加而增加,差异有统计学意义(P<0.01);MGMT基因的mRNA及蛋白表达水平则随损伤的增加而下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论叶酸浓度降低对MNNG致哈萨克族食管上皮细胞损伤有一定的促进作用,而保持充足的叶酸则对MNNG的损害起到一定的保护作用。

摘要：目的:探讨叶酸在N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)影响哈萨克族食管上皮细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)活性及表达中的作用,为食管癌的防治提供理论依据。方法:采用3因素3水平(3×3)析因设计将体外培养的哈萨克族食管上皮细胞分别暴露于不同浓度叶酸(0.000、0.400、0.800μg/m L)和MNNG(0.000、0.750、1.500μg/m L)的培养液中作用48、72和96 h后,采用ELISA法检测DNMT1酶活性;采用RT-PCR的方法检测DNMT1 m RNA表达水平;采用Western blot法检测DNMT1蛋白的表达水平。结果:不同浓度叶酸、MNNG作用细胞不同时间后,在固定MNNG浓度和时间因素下,随着叶酸浓度的增加DNMT1酶活性、DNMT1 m RNA和蛋白表达水平均逐渐降低(P均<0.01);固定叶酸浓度和时间,随着MNNG浓度的增加DNMT1酶活性、DNMT1 m RNA和蛋白表达水平均逐渐升高(P均<0.01);固定MNNG和叶酸浓度,随着干预时间的延长DNMT1酶活性、DNMT1 m RNA和蛋白表达水平均逐渐升高(P均<0.01);叶酸浓度与MNNG浓度之间、MNNG浓度与作用时间之间均存在交互作用(P<0.01)。不同叶酸浓度与不同MNNG浓度之间、不同叶酸浓度与不同作用时间之间、不同MNNG浓度与不同作用时间之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:叶酸浓度降低对MNNG影响哈萨克族食管上皮细胞DNMT1酶活性及表达有一定的激发作用,对食管癌的发生有一定的促进作用,而保持充足的叶酸则对MNNG的损害起到一定的保护作用。

摘要：目的探讨叶酸在N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)致哈萨克族(哈族)食管正常上皮细胞增殖、细胞周期及凋亡中的作用。方法采用3因素3水平(33)析因设计将体外培养的哈族食管正常上皮细胞暴露于不同浓度叶酸(0.000、0.400、0.800μg/mL)和MNNG(0.000、0.750、1.500μg/mL)的培养液中作用48、72和96h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测叶酸及MNNG对哈族食管上皮增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果随着叶酸浓度的降低和MNNG浓度增加,哈族食管正常上皮细胞形态发生了明显的变化,死细胞数目逐渐增多,细胞核出现不同程度的破裂,胞质不匀和细胞完整性损伤,细胞对MNNG损害的敏感性明显增加,96h时尤为严重;哈族食管正常上皮细胞的抑制率升高,差异有统计学意义(P<0.05);哈族食管正常上皮细胞G0+G1期、S期和G2+M期细胞比例不同,差异有统计学意义(P<0.05),细胞周期阻滞在S期和G2+M期;哈族食管正常上皮细胞的凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论叶酸浓度降低对MNNG致哈族食管正常上皮细胞损伤有一定的促进作用。