摘要：根据鸭疫里默氏杆菌(RA)16SrRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了检测RA的实时荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,2株RA均呈阳性,而3株非RA均呈阴性。试验结果表明,该方法具有良好的特异性,该方法的表达式Ct=-3.676×lg copies+45.17,相关系数r2=0.996,R循环效率Eff(%)=93.482,DNA拷贝数在100～108范围内检测曲线有良好的线性关系,对质粒标准品的最低检测限为1.0×101 copies/μL,重复性检测的变异系数低于5%,利用该方法分别对自然感染表现典型鸭疫里默氏杆菌病临床症状和病理变化的死亡雏鸭肝、心、脑组织等不同脏器进行细菌定量检测,阳性率均为100%,而用普通PCR检测阳性率分别只有72%(18/25)、84%(21/25)和92%(23/25)。证实本研究所建立的荧光定量PCR方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点,可用于RA感染的快速诊断、流行病学调查以及鸭产品的检疫。

摘要：根据GenBank中的鸭疫里默氏杆菌（RA）1-19型16 S rRNA基因序列,分别与大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的16 S rRNA基因序列对比,设计特异性引物,建立了基于鸭疫里默氏杆菌16 SrRNA的PCR检测方法。结果表明,用该方法对鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌进行检测,只有鸭疫里默氏杆菌的DNA能扩增出680 bp的特异条带,其他细菌的DNA不能扩增出任何条带;测序结果与GenBank中鸭疫里默氏杆菌相应序列完全一致;同时分别将鸭疫里默氏杆菌基因组DNA和菌液10倍稀释进行PCR扩增,对鸭疫里默氏杆菌DNA的最小检出量为1.907×10^-5g/L,对鸭疫里默氏杆菌菌液的最小检出量为1.5×10^4CFU/mL。证实,建立的基于鸭疫里默氏杆菌16 S rRNA的PCR检测方法具有快速、灵敏、特异的优点,可用于鸭疫里默氏杆菌感染的检测、分子流行病学调查和分离菌株的快速鉴定。

摘要：根据鸭坦布苏病毒(DTMUV)BYD-1株基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了快速检测DTMUV的实时荧光定量RT-PCR方法。特异性结果显示,DTMUV显示阳性,而3株非鸭坦布苏病毒均显示阴性,说明该方法具有高度特异性。其表达式为Ct=-3.32×lg Copy number+41.151,R2=0.998,R循环效率Eff%=100.072,DNA拷贝数在101～108范围内检测曲线有良好的线性关系,对质粒标准品最低检测限为1.0×101拷贝/μL,变异系数低于5%。利用该方法分别对攻毒感染具有典型鸭新型黄病毒病临床症状和病理变化的蛋鸭的脾脏和肝脏组织进行检测,阳性率均为100%,而用本实验室建立的普通RT-PCR方法检测的阳性检测率为85%(17/20)和75%(15/20)。建立的方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点,可用DTMUV早期感染的快速诊断和流行病学调查。