摘要：G-四链体序列可与Hemin结合形成具有过氧化物酶活性的DNAzyme,被广泛应用于生物传感器的构建中。G-四链体的过氧化物酶活性高低对生物传感器构建至关重要。本研究利用圆二色谱比较分析了生物传感器中常用G-四链体序列的空间构型,筛选出过氧化物酶活性高的G-四链体序列,并比较了G-四链体中鸟苷酸聚集单元数、K+及Hemin对其过氧化物酶活性的影响。本研究应用高过氧化物酶活性的G-四链体作为可视检测信号核酸分子设计了一种可用于核酸检测的G-四链体等温信号扩增体系,不同于通常核酸检测方法直接对目标序列进行扩增,该体系在等温条件下,通过剪切与置换进一步大量扩增作为信号分子的G-四链体序列,致使整个核酸检测过程更为简便,为生物传感器构建、新型核酸检测技术研发提供了新的思路和技术支持。

摘要：目前转基因作物检测通常使用PCR检测方法,PCR检测耗时较长且需要精密控制温度循环的仪器,不适于现场检测。本研究应用重组酶聚合酶等温扩增技术（recombinase ploymerase amplification,RPA）,根据转基因抗虫水稻科丰6号插入连接区整合序列设计筛选了一套可用于RPA检测的引物及探针组合,建立了转基因抗虫水稻科丰6号及其衍生品种转化体特异性荧光RPA检测方法。研究结果表明本方法可稳定特异检出样品中500个拷贝的靶标分子,利用实时荧光检测简化了检测程序,使检测可在10~20 min内完成,与常规PCR检测需要数小时相比极大地缩短了检测时间。使用锂电池驱动的便携式扩增检测仪,对于野外转基因现场检测具有极大的应用价值。

摘要：重组酶聚合酶介导的等温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)作为一种新型等温扩增技术,具有反应时间短、灵敏度高、特异性强等特点,在转基因检测领域得到了广泛关注。本研究针对转基因玉米Bt11外源插入链接区域设计筛选了特异性引物和探针,建立了快速准确的荧光RPA检测方法,在39℃条件下,20 min内完成扩增并且能够实时监测,可以准确有效地检测到50个拷贝的靶标片段。而且,对于背景复杂的植物基因组DNA能够得到准确的扩增曲线。本研究不仅可以满足常规实验室检测,通过RPA便携式仪器,还可以满足转基因植物现场检测,具有广阔的应用前景。

摘要：以我国批准进口用作加工原料的6种转基因玉米为材料,根据其外源基因、载体构建及插入位点,应用6对特异性引物及35S、NOS引物,设计并优化了复合PCR反应体系,对其进行转基因成分检测。同时尝试利用复合PCR与DNA芯片相结合,对不同转基因玉米混合样品进行检测,探索建立转基因事件快速检测和确认方法。

摘要：通过3'端2次高效热不对称交互PCR(hiTAIL-PCR)和5'端4次hiTAIL-PCR及1次长链PCR获得了转基因抗虫棉材料06N-119的外源DNA插入片段的全序列。外源DNA插入片段全长11578bp,由NptⅡ基因和Bt基因两个表达盒串联构成。插入位点处缺失75个碱基,未发生基因重组现象。根据3'端旁侧序列设计引物,特异性和灵敏度检测结果表明,建立的3'端定性PCR检测方法特异性强,灵敏度高,最低检测限为每100ng模板量的0.05%,相当于11个靶标序列拷贝。本研究结果对转基因抗虫棉外源基因检测和生物安全评价具有重要意义。