摘要：目的建立马尔堡病毒的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）可视化快速检测方法。方法人工合成马尔堡病毒保守的核蛋白（Nucleoprotein,NP）编码基因作为阳性标准品,设计LAMP扩增引物,以HNB作为可视化指示剂,通过LAMP浊度仪测定方法的灵敏度和特异性。并与常规PCR、实时荧光定量PCR作比较。结果建立的LAMP方法的灵敏度为10^0拷贝/μl,高于常规PCR及实时荧光定量PCR的灵敏度10^3拷贝/μl和10^2拷贝/μl,方法的特异性好,仅马尔堡病毒有扩增曲线且HNB指示剂颜色发生阳性改变,其他病毒扩增均为阴性。体系的扩增效率较高,试验仅需30min。结论建立的HNB-LAMP检测方法简便、快速、灵敏、特异,适用于马尔堡病毒的可视化快速检测。

摘要：目的 建立克里米亚刚果出血热病毒（Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV）的可视化逆转录环介导等温扩增（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RTLAMP）快速检测法.方法 体外合成CCHFV的S基因,构建重组质粒,体外转录为模板RNA,在线设计3组LAMP引物,使用实时浊度仪筛选出最佳引物,以羟基萘酚蓝（Hydroxynaphthol blue,HNB）作为指示剂,建立可视化RT-LAMP反应体系.结果 实时浊度检测结果显示合成的3组LAMP引物中第1组引物的扩增效率最高,峰值出现于20 min.添加环引物后,扩增效率进一步提高,13 min即可达到峰值.利用最佳引物建立的CCHFV可视化RT-LAMP检测法最低检测限浓度为10拷贝/μl,检出时间为30 min,较巢式RT-PCR法和实时定量RT-PCR法分别高1-3个数量级.该方法稳定性好,不会与症状相近的病原体如肾综合征出血热汉坦病毒（汉滩型和汉城型）、马尔堡病毒、新型布尼亚病毒、埃博拉病毒（GP蛋白和VP蛋白）产生交叉反应.结论 建立的CCHFV可视化RT-LAMP检测法,灵敏度好、特异度高、快速廉价、操作简单,无需开盖即可直接观察结果,适用于条件有限的基层单位和偏远地区.但仍需临床样本进行进一步验证.