摘要：目的对外周血染色体吉姆萨显带制备条件进行优化,以提高染色体制备成功率。方法选取2021年4月~2022年4月因不孕不育就诊于梧州市工人医院生殖医学中心的116例成年患者的外周静脉血为研究对象,其中单因子梯度实验15例,正交实验设计1例,优化前组50例和优化后组50例。在现有染色体制备体系基础上,通过单因子梯度实验对影响外周血染色体制备成功率的秋水仙素作用浓度、作用时间及低渗处理时间进行优化,根据单因子梯度实验结果进行3因素3水平正交实验设计,以染色体制备成功率最高的条件组合作为最适的外周血染色体制备体系。并进一步对优化前、后两组<320带,320~400带和400~550带的分裂相所占比例进行比较分析。结果单因子梯度实验结果表明,染色体制备成功率随着秋水仙素作用浓度、作用时间及低渗处理时间的增加均呈先升高后下降趋势。在秋水仙素不同作用浓度实验中,当秋水仙素作用浓度为0.24μg/ml时染色体制备成功率最高,达67.67%;在秋水仙素不同作用时间实验中,当秋水仙素作用时间为30 min时染色体制备成功率最高,达62.33%;在不同低渗处理时间实验中,当低渗处理时间为35 min时染色体制备成功率最高,为64.17%。根据单因子梯度实验结果,秋水仙素作用浓度设置0.20,0.24,0.28μg/ml三个水平,秋水仙素作用时间设置25,30和35 min三个水平,低渗处理时间设置30,35,40min三个水平,进行正交实验设计。结果表明秋水仙素作用浓度为0.24μg/ml,秋水仙素作用时间30 min,低渗处理时间40 min是外周血染色体制备最适体系。优化前组吉姆萨显带<320带的分裂相占比(64.30%)显著高于优化后组(43.78%),差异具有统计学意义(χ^(2)=508.443,P<0.001);优化后组320~400带,400~550带分裂相占比(40.30%,15.29%)均显著高于优化前组(33.12%,2.58%),差异具有统计学意义(χ^(2)=66.629,635.346,均P<0.001)。结论经优化后确定的染色体制备体系可提高染色体制备成功率,值得临床应用与推广。

摘要：目的评价短暂前脑缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)对大鼠海马中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)启动子与组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)结合的影响,并探讨其作用机制。方法采用Pulsinelli四血管夹闭法建立SD大鼠的I/R模型(I/R组),同时设假手术组(Sham组)。尼氏染色法观察大鼠海马中神经元存活情况;染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)法检测大鼠海马中BDNF启动子(Bdnf-p1、Bdnf-p2、Bdnf-p4和Bdnf-p6)与HDAC3的结合情况;qPCR法检测大鼠海马中反义脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor antisense,BDNF-AS)的表达情况。结果与Sham组比较,I/R组大鼠海马CA1区神经元数目大幅减少,CA3和DG区神经元数目变化较小。I/R组大鼠海马CA1区中Bdnf-p1和Bdnf-p2与HDAC3结合水平明显降低(t分别为2.575和2.241,P均0.05);CA3区中Bdnf-p1和Bdnf-p2与HDAC3结合水平明显增加(t分别为12.600和3.191,P分别0.05);DG区中各BDNF启动子与HDAC3结合水平差异均无统计学意义(t=0.630~1.687,P均>0.05)。I/R组大鼠海马CA1区中BDNF-AS的表达水平明显降低(t=2.560,P<0.05),在CA3及DG区的表达水平均明显升高(t分别为3.543和3.637,P均<0.01)。结论I/R对大鼠海马中BDNF启动子与HDAC3的结合水平有显著影响,可能是通过改变BDNF-AS表达水平发挥作用。