摘要：通过响应曲面法(RSM)优化巴氏毕赤酵母基因工程菌GS115/pPIC9KG6表达高亲水性重组人源胶原蛋白的摇瓶培养条件。采用Box-Behnken设计(BBD)考察初始诱导pH值、温度和甲醇添加量三个主要影响因子对重组人源胶原蛋白表达量的影响,利用DX7Trial软件设计实验方案,根据该方案设置不同培养条件进行实验并测定相关参数。响应面分析确定的最优因素水平组合为:初始诱导pH值为5.0,诱导温度为28℃,甲醇添加量为2.2%/24 h。通过响应面法优化发酵的内在因素水平,找出最佳条件,为利用其指导在发酵罐中进行高密度发酵生产人源胶原蛋白奠定基础。

摘要：基于人胶原蛋白胶原域序列特征,设计合成了一段类人胶原蛋白基因单体gel。采用同向串联方式,构建了含6个单体的类人胶原蛋白表达载体pPIC9KG6,并经DNA测序鉴定。将pPIC9KG6电转化毕赤酵母(Pichia pastoris)经G418筛选得到多拷贝转化子,通过甲醇诱导表达类人胶原蛋白,SDS-PAGE检测表明:初步表达的类人胶原蛋白为胞外产物,其表观分子量为112 ku。

摘要：目的优选苦柏止痒擦剂的提取工艺条件。方法以黄柏中盐酸小檗碱的提取量和全方药材提取的固形物得率的综合评分为考察指标,采用L9(34)正交实验设计进行优选。结果优选的最佳提取工艺为:以渗漉法进行提取,6倍量75%乙醇,浸润6 h,调节渗漉速度3 m L/(min·kg)。经3次验证实验盐酸小檗碱含量和固形物得率平均值分别为2.12 mg/m L和7.35%。结论优选的提取工艺稳定,合理可行,提取率高。