摘要：【目的】红色亚栖热菌(Meiothermus ruber)海藻糖合酶(Trehalose synthase,M-TreS)将麦芽糖转化生成海藻糖只需一步反应,且具有很好的热稳定性及pH耐受性,是潜在的工业生产海藻糖的酶源。为了提高该酶的性能,有必要对其进行定向进化。【方法】M-TreS基因(M-treS)大小为2 889 bp。该蛋白质分子本身具有很大的进化空间,但是却不宜进行全长基因Shuffling。分段DNA shuffling是为大分子蛋白质(基因≥2 000 bp)的进化而设计的一种方法。该方法分为三步:(1)用两对引物分别扩增目的基因的上游片段和下游片段;(2)上下游片段各自进行Shuffling;(3)利用重叠延伸PCR连接上下游突变群,建立完整基因的突变文库。【结果】结合易错PCR,通过该方法经一轮进化获得一株酶活力是野生型1.6倍、催化效率是野生型2倍的突变株。序列分析表明,该突变株共有6个位点发生了氨基酸的替代,其中一个来自易错突变,2个来自同源重组,3个为随机突变。【结论】分段DNA shuffling是进化大分子蛋白质的有效方法。

摘要：由于高温和温度分布不均等客观条件,发动机缸盖往往容易形成热疲劳裂纹,严重影响着发动机的可靠性和耐久性。因此,在发动机开发过程中,准确获得气缸盖温度场分布状况极为重要。基于NI硬件设备和LabVIEW软件开发环境设计了一套热电偶温度采集系统,并结合红外测温系统的使用特点,对某单缸风冷汽油机气缸盖进行温度场测试试验研究,以寻求更优的气缸盖温度场测试试验方法,并根据试验数据分析该发动机气缸盖热状态及其随运行工况变化的规律。