摘要：采用聚合酶链式反应技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆2-酮基葡萄糖酸激酶的全长基因kguK,并在此基础上构建了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kguK。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个特异的分子质量约为36.0 ku融合蛋白,且该蛋白的Western-Blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由305个氨基酸残基组成的亲水性蛋白,定位于细胞质中,存在着与pfkB家族蛋白类似的保守结构域,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为35.73%、12.79%和51.48%。

摘要：经超声破碎细胞、TritonX-114相分离、盐析、DEAE-sepharose离子交换层析和Hydroxyapatite吸附层析等步骤,从2-酮基葡萄糖酸(2-keogluconic acid,2KGA)生产菌株粘质沙雷氏菌JUIM03中获得比活力91.43 U/mg、纯化倍数160.4 倍的膜结合葡萄糖酸脱氢酶(gluconate dehydrogenase,GADH)。研究结果表明,粘质沙雷氏菌膜结合GADH由3 个亚基组成,其分子质量分别为65.0、45.0 kDa和23.0 kDa左右,是一种含有细胞色素C的黄素蛋白,能够催化氧化葡萄糖酸为2KGA。粘质沙雷氏菌膜结合GADH的最适反应温度为40 ℃,最适反应pH 5.0,在30 ℃以下、pH 5.0~6.0的条件下较为稳定;该酶具有严格的底物特异性,只有在D-葡萄糖酸作为底物时才具有催化活性,其Km值为1.33 mmol/L;一些金属离子(如Fe3+、Cu2+ 和Zn2+ )、有机溶剂(乙醇、异丙醇、甲醇和丙酮)、变性剂(十二烷基硫酸钠和巯基乙醇)以及有机酸(草氨酸和草酸)对膜结合GADH的催化活性具有明显的抑制作用。研究为粘质沙雷氏菌2KGA生物合成的过程优化与控制提供了一定的理论依据。

摘要：采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kgu E。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,获得了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kgu E。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个分子质量约为30.5 ku的融合蛋白,且该蛋白的Western-blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由256个氨基酸残基组成的分子质量为28.5 ku的亲水性蛋白,与恶臭假单胞菌的2-酮基葡萄糖酸差向异构酶在氨基酸序列上的一致性达78%,定位于细胞质中,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为40.62%、17.19%和42.19%。本研究结果为变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的功能研究提供了一定理论支持。

摘要：随着我国畜牧业生产总体水平的不断提高,畜牧养殖产生了越来越多的污染物,给畜牧业清洁生产造成了很大的压力。文章从禽畜养殖规模与养殖场建筑结构设计、饲料品质改良等手段阐述了从源头上减少粪污排放;畜禽养殖场清粪工艺中采取干清粪工艺可以减少养殖过程中污水的产生量;好氧堆肥和厌氧发酵可以使排出的粪污变为有机肥料和沼气得以资源化利用。养殖场干清粪固态酸化厌氧产气与达标排放工艺的设想能提升规模化畜禽养殖业干清粪处理效率以及沼气和有机肥料的产量和品质,实现养殖场污水达标排放,降低粪污处理系统的固定投资和运行成本。

摘要：应用L9(34)正交设计优化碱性蛋白酶水解小麦面筋蛋白的最适条件,以DPPH自由基清除率为筛选指标,结果表明当温度为60℃、pH 8、底物量5 g、水解时间25 min时,酶解液的DPPH自由基清除率达到87.67%,具备较强的体外抗氧化活性,值得深入研究。

摘要：以DPPH自由基清除率为指标,采用单因素和正交实验研究了酸性蛋白酶木瓜蛋白酶(精)对小麦面筋蛋白水解最适条件。结果表明,最佳酶解条件为温度70℃,pH6.0,底物量7g,水解时间5h;在此条件下,DPPH自由基清除率达到92.65%,效果显著。