摘要：4-羟基-3-甲基-2赤藓磷酸合酶(4-hydroxy-3-methyl-2-butenyl diphosphate synthase, HDS)是单萜合成途径中的关键酶。为揭示其在‘西伯利亚’百合(Lilium ‘Siberia’)萜烯合成中的作用,本文克隆了LiHDS基因,进行生物信息学分析、亚细胞定位和病毒诱导基因沉默(VIGS)功能验证,并采用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)对该基因进行时空表达分析。结果表明, LiHDS基因开放阅读框为2 223 bp,编码蛋白包括740个氨基酸,理论分子量81 967.95,理论等电点为5.76,与小果野蕉(Musa acuminata)等HDS蛋白相似度较高,LiHDS蛋白主要定位在叶绿体。LiHDS在内花被片与外花被片中表达量最高,在根和叶中表达量最低。花被片中LiHDS基因在盛开期表达量最高,衰败期最低。LiHDS基因被沉默后,罗勒烯和芳樟醇释放量显著降低,分别下降79%和73%,说明LiHDS基因在百合单萜合成中起着重要作用。

摘要：4-二磷酸胞苷-2-C-甲基赤藓糖激酶(CMK)是萜类花香合成甲基赤藓糖醇磷酸(MEP)途径的关键酶,为揭示其对百合花香的调控作用,从‘西伯利亚’百合(Lilium‘Siberia’)中克隆LiCMK基因,进行生物信息学分析,利用亚细胞定位确定蛋白位置,采用荧光定量PCR技术检测基因时空表达模式,并运用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法瞬时沉默LiCMK,验证其功能。结果显示,LiCMK全长1200 bp,编码399个氨基酸,属于IspE家族,与油棕(Elaeis guineensis)中的CMK相似度最高。LiCMK的表达随花期呈现先上升后降低的规律,在盛花期的表达量达到峰值,在花器官中的表达量明显高于茎、叶中的表达量。LiCMK蛋白定位于叶绿体中。LiCMK在百合中瞬时沉默后,LiCMK表达水平下降了约84%,主要的单萜合成基因表达量明显下降,月桂烯合酶基因(MYS)、罗勒烯合酶基因(OCS)和芳樟醇合酶基因(LIS)分别降低了57%、59%和63%,主要的单萜类化合物月桂烯、罗勒烯和芳樟醇释放量显著下降。结果表明,LiCMK基因对‘西伯利亚’百合单萜化合物的合成与花香释放有重要作用,为后续深入研究百合单萜合成及其花香释放的调控机制奠定基础。

摘要：目的以间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)为靶点筛选儿童神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)的靶向治疗药物。方法借助计算机辅助药物的虚拟筛选技术筛选靶向结合ALK的命中化合物,通过分子动力学模拟验证命中化合物与ALK的结合能力,通过CCK-8试验验证命中化合物对NB细胞的杀伤作用,通过Western blotting试验检测命中化合物对ALK的抑制作用。结果虚拟筛选和分子动力学模拟试验发现6种命中化合物中栎草亭能够和ALK形成稳定的受体-配体二元复合物。体外细胞实验表明栎草亭能抑制ALK表达,诱导NB细胞凋亡,并对NB细胞有杀伤作用。结论栎草亭可能是治疗NB的有效候选药物。