摘要：目的建立检测棘鳞蛇鲭(Ruvettus pretiosus, RP)和异鳞蛇鲭(Lepidocybium flavobrunneum, LF)两种油鱼的双重实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法。方法基于棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因分别设计特异性引物和探针,并对方法进行灵敏度、特异性和重复性分析,建立双重实时荧光PCR方法。结果模板量在8.4×10^5~8.4×10^0 copies/μl范围内,方法具有良好的线性关系,棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭的线性回归方程分别为y=-3.18x+41.0(R^2=0.998 8)和y=-3.37x+44.5(R^2=0.998 6),方法组内相对标准偏差(RSD)为0.29%~0.84%。其中,检测棘鳞蛇鲭的组内RSD为0.29%~0.84%,检测异鳞蛇鲭的组内RSD为0.29%~0.62%。方法最低检测限为16.8 copies/反应,并且从随机购买的50份鳕鱼样品中鉴定出油鱼成分棘鳞蛇鲭。结论本试验建立的双重实时荧光PCR方法能够特异性地鉴定出棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭,具有实际应用潜力。

摘要：针对基因4型戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)基因组ORF3设计特异性引物和探针,建立了一套TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法。评价了该方法的准确性和灵敏性,同时与常规RT-PCR和巢式RT-PCR方法进行了对比分析。结果表明,生成的标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数(r2)为0.994,斜率为-3.312,PCR效率为100%。组内和组间重复性试验相同稀释度标准质粒Ct值之间差异均不显著,并且能够准确的从HEV阳性猪粪便样品中检测到基因4型HEV RNA,具有较好准确性。可检测到戊型肝炎病毒数量为(1.7×101)copies,比普通RT-PCR的灵敏度高100倍,比Nested RT-PCR高10倍。

摘要：目的 利用实时荧光PCR及高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫Ⅲ期幼虫。 方法 针对广州管圆线虫核糖体RNA基因的内转录间隔区（ITS）序列设计引物，应用实时荧光PCR和高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫Ⅲ期幼虫。并通过检测广州管圆线虫、华支睾吸虫和棘颚口线虫DNA，分析该方法的特异性；分别检测1~10条广州管圆线虫Ⅲ期幼虫DNA，分析该方法的敏感性。 结果 该方法能够特异性检测广州管圆线虫幼虫，检测华支睾吸虫和棘颚口线虫时未出现扩增曲线和熔解曲线峰。检测灵敏度可达到1条幼虫。 结论 实时荧光PCR及高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫幼虫具有较好的特异性和敏感性。