摘要：目的研发一种混合动力超声气压弹道碎石清石系统(EMS)的无线手控操作装置并对其在经皮肾镜碎石术中应用的舒适度和疗效进行评估。方法对现有瑞士EMS公司碎石系统的脚踏开关进行电路分析,掌握其控制原理,绘制无线控制原理框图,制作样机,进行体外试验,进一步进行初步临床应用与评价。选取2023年5月至2023年9月苏州大学附属第二医院泌尿外科收治的20例行经皮肾镜碎石取石术(PCNL)患者为研究对象,设计《手术易用性、舒适度和碎石效率评分表》,采用简单随机化分组,分为无线手控组和脚控组各10例,对该无线手控系统的易用性、使用舒适度、碎石效率进行评估,使用两独立样本t检验进行组间比较。结果成功研发出无线手控装置样机,体外实验证实可实现无线手控碎石。成功进行无线手控系统的临床应用,结果显示无线手控组的平均易用性得分和平均舒适度得分[(9.70±0.48)、(9.70±0.48)分]均高于脚控组[(6.20±0.79)、(5.30±0.48)分],差异有统计学意义(t=11.966、20.368,P0.05)。结论该EMS无线手控系统能够在保证碎石效率的同时提高手术的舒适度与操作的灵活性。

摘要：目的研究采用RNA干扰技术抑制雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞中Survivin 基因的表达对PC-3细胞增殖及凋亡的影响。方法设计2条靶向Survivin mRNA的Survivin shRNA,克隆至同一质粒载体,并鉴定分析;质粒转染PC-3细胞,绘制细胞生长曲线;并于转染48 h 后进行Survivin基因蛋白表达及细胞凋亡检测。结果酶切鉴定、测序分析证实负载双片段Sur- vivin shRNA的质粒载体构建成功。转染PC-3细胞后,细胞生长曲线示实验组PC-3细胞增殖明显受抑制;转染后48 h．实验组、阴性对照组、空白对照组Survivin蛋白表达强度分别为(4．62± O．84)％、(38．83±7．96)％和(40．98±3．83)％,实验组与两对照组相比差异均有显著性意义(P< 0．05);转染48 h后PC-3细胞凋亡率开始增加。结论负载双片段Survivin shRNA的质粒载体转染PC-3细胞后能明显抑制PC-3细胞增殖,抑制PC-3细胞Survivin蛋白表达,并能诱导PC-3细胞凋亡。但诱导PC-3细胞凋亡最明显的时机需要进一步观察。

摘要：目的观察基质交联分子1（STIM1）对前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞凋产的影响。方法自行设计合成STIM1小干扰RNA（siRNA）片段，构建可抑制STIM1表达的质粒载体pGCSIL—GFP—STIM1，外源验证其抑制STIM1的有效性后，将其进行慢病毒包装，取名为STIM1-RNAi—LV，转染人PC-3细胞后，检测PC-3细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的变化。结果构建的pGCSIL—GFP—STIM1质粒载体经测序及聚合酶链反应（PCR）检测，序列准确；经外源性验证，可有效抑制STIM1的表达。将STIMI—RNAi—LV转染入前列腺癌PC-3细胞株后，随时间的延长，实验组PC-3细胞增殖数目明显下降，同对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。转染5d后，实验组PC-3细胞凋亡率为（29．85±0．86）％，阴性对照组（2．92±0．14）％，两组差异有统计学意义（P〈0．05）；同样转染5d后，实验组PC-3细胞中G1期、S期细胞数下降，G2／M期细胞数增加，同对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论体外抑制前列腺癌PC-3细胞中STIMI表达后，PC-3细胞增殖减慢，细胞凋亡增加，细胞周期发生明显改变。它提示STIM1在前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡过程中起重要作用．

摘要：目的:快速构建人组蛋白甲基转移酶(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)启动子荧光素酶报告载体并验证其活性。方法:因EZH2启动子富含GC,故应用Gibson Assembly方法设计分两段扩增,然后将片段一步法连入pGL3-Basic质粒,构建荧光素酶报告载体,进行酶切鉴定。与p RL-TK内参照质粒共转染C4-2细胞,双荧光素酶分析法检测启动子的活性。结果:经酶切鉴定证实成功构建了EZH2启动子报告载体,双荧光索酶报告基因检测结果显示构建的报告载体具有启动子活性。结论:快速成功构建了具有启动子活性的EZH2启动子荧光素酶报告载体,为进一步研究前列腺癌中EZH2表达调控机制提供必要的实验材料。

摘要：目的:构建负载双片段survivin短发夹RNA(shRNA)的腺病毒载体,为PCa的基因治疗提供实验基础。方法:分别设计2条靶向survivin基因的shRNA,克隆至穿梭质粒载体中,特异性酶切后亚克隆至腺病毒骨架,构建负载2条survivin shRNA的RNA干扰重组腺病毒载体。提取环状重组病毒质粒进行PCR、酶切双重鉴定后,大规模提取纯化正确的克隆。最后将线性化的重组腺病毒基因组转染至HEK293A包装细胞包装成病毒,并扩增到所需滴度。结果:负载双片段survivin shRNA的穿梭质粒载体pShuttle2经MluⅠ酶切鉴定,证实双片段survivinshRNA插入正确;完成目的片段至腺病毒骨架的亚克隆后,PCR及PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切鉴定均证实双片段sur-vivin shRNA插入正确。结论:负载双片段survivin shRNA腺病毒载体构建成功。

摘要：目的:设计构建负载双片段survivin短发夹状RNA(shRNA)的质粒载体,为进行前列腺癌(PCa)基因治疗的研究奠定基础。方法:分别设计2条靶向survivin基因的shRNA,克隆至质粒载体中,再分别提取质粒酶切后回收、连接,构建重组质粒,提取重组质粒酶切鉴定、测序分析。结果:负载不同单片段survivinshRNA的质粒载体分别用EcoRⅠ及SacⅠ酶切鉴定,证实设计的2条单片段survivinshRNA已经分别插入目的质粒中;基因重组后,重组质粒载体用BamHⅠ酶切鉴定,证实双片段survivinshRNA均已插入重组质粒载体中;测序结果证实重组质粒载体插入的双片段survivinshRNA序列均正确无误。结论:负载双片段survivinshRNA的RNA干扰重组质粒载体构建成功。

摘要：目的观察靶向survivin基因不同位点的小干扰RNA(siRNA)对人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞survivin mRNA表达的抑制作用以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法根据survivin mRNA的结构特点,选取2个不同的作用位点,设计和构建负载survivin shRNA片段的2种重组质粒载体。以脂质体法转染PC-3细胞株,荧光显微镜下观察转染效率。实验分为survivin1组、survivin2组、阴性对照组和空白对照组。转染后24、48和72h,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中survivin mRNA的表达,MTT法检测siRNA对PC-3细胞增殖的影响,流式细胞术检测凋亡率。结果与对照组相比,survivin1组、survivin2组对survivin mRNA的表达均能产生抑制效应,48h抑制率最高,survivin1抑制率高,达52%。实验组均能抑制PC-3细胞的增殖,survivin1抑制细胞增殖的能力强。转染48h后,细胞凋亡最明显,survivin1组凋亡率高,达13.6%±1.8%。结论在RNAi研究中,根据特定靶基因mRNA的结构特点来进行siRNA的设计和筛选,在前列腺癌的基因治疗中具有一定的实际应用价值。

摘要：果蝇zeste基因增强子同源物2（EZH2）是组蛋白甲基转移酶。研究表明EZH2在前列腺癌中起关键作用[1]。我们应用GibsonAssembly法构建了pWPI-HA-EZH2慢病毒载体。一、材料与方法***载体PacI和PmeI双酶切后，削平黏性末端，去磷酸化。2．以pCMV-HA-EZH2质粒为模板，设计引物，序列：上游：CTCAGGAATTTCGACATTTTAAA佃IAATGGCATACCCATACGAT-GTTCCA，下游：TCCTGCAGCCCGTAGTTTTCAAGGGATITCCAT-TTCTCTTT。聚合酶链反应（PCR）扩增目的片段，回收产物。