摘要：目的构建小鼠白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)及其shRNA重组表达质粒。方法以小鼠脾脏细胞总RNA为模板,PCR扩增IL-17基因,并亚克隆至质粒pLVX-IRES-ZsGreen1,构建重组表达质粒pLVX-IL-17-IRESZsGreen1;设计并合成3对针对IL-17基因的shRNA序列和1对阴性对照shRNA序列,分别插入质粒pLVX-shRNA,构建重组干扰质粒pLVX-shRNA1、pLVX-shRNA2、pLVX-shRNA3和阴性对照质粒shRNAC,进行测序;用脂质体法将各重组干扰质粒分别与表达质粒共转染293T细胞,分为空白对照组、过表达组、shRNA1组、shRNA2组、shRNA3组和shRNAC组,经荧光定量PCR和ELISA法分别检测各组细胞中IL-17基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果 PCR扩增获得500 bp的目的基因,IL-17重组表达质粒及其shRNA重组质粒经酶切及测序鉴定证明构建正确;重组表达质粒转染293T细胞48 h后可见绿色荧光表达;过表达组IL-17基因mRNA及蛋白表达水平均明显高于空白对照组(P均<0.05),shRNA1组、shRNA2组和shRNA3组IL-17基因mRNA和蛋白表达水平均明显低于shRNAC组(P均<0.05)。结论成功构建了小鼠IL-17基因重组表达质粒及其特异性shRNA表达质粒,并筛选出shRNA1,其对IL-17的表达具有最佳的抑制效应。

摘要：目的探讨信息化翻转课堂结合CDIO模式对儿科护生理论与操作成绩、自主学习能力、批判性思维能力、创新能力及教学兴趣度和满意度的影响。方法选取2020年9月—2022年9月在重庆医科大学附属儿童医院肾脏科实习的75名护生,2020年9月—2021年9月进入临床实习的35名护生为对照组,采用常规带教模式。2021年9月—2022年9月进入临床实习的40名护生为研究组,采用信息化翻转课堂结合CDIO模式的教学方法。教学5周后比较两组的理论考核与操作考核成绩、自主学习能力、批判性思维能力、创新能力、对教学模式的兴趣度和满意度。结果研究组理论考核与操作考核成绩、自主学习能力评分、批判性思维能力评分、创新能力评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。研究组对教学模式的兴趣度和满意度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论信息化翻转课堂结合CDIO模式应用于儿科临床护理教学中,有利于护生对理论知识和实践技能的运用及掌握,提高其自主学习能力、批判性思维能力、创新能力和教学满意度。

摘要：为建立猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)TaqMan双重荧光定量PCR检测方法,研究根据Gen Bank中已登录的PRRSV-M基因序列和PCV2cap基因序列,设计了2对特异性引物和2条Taq Man探针。结果显示以含有PRRSV-M基因和PCV2-cap基因的重组质粒为模板绘制的标准曲线,其相关系数(R^(2))均大于0.99,线性关系较好。该方法仅对PRRSV和PCV2检测为阳性,而对PRV、CSFV、PEDV、TGEV检测结果均为阴性,表明其特异性较好。检测下限约为10拷贝/μL,重复性试验结果显示该方法的组内和组间变异系数均小于1.5%,利用国标荧光定量PCR方法与本实验建立的方法分别对42份临床样品进行检测,二者对PRRSV和PCV2检测的符合率分别可达96.4%和100%。研究表明所建立的荧光定量PCR方法具有快速、敏感、准确等优点,可以用于PRRSV和PCV2的双重定量检测。