摘要：为建立快速检测蜜蜂欧洲幼虫腐臭病(EFIB)病原菌蜂房蜜蜂球菌(***)的方法,本研究根据*** 16S rRNA基因序列,设计并合成特异性引物和TaqMan探针,经反应参数优化,建立了检测*** TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明,该方法与其它蜜蜂常见病病原均无交叉反应;该方法的灵敏度为1.0×10~1拷贝/μL的阳性质粒,比普通PCR灵敏1 000倍;重复性试验表明该方法的批内和批间变异系数均小于1%。应用该方法对100份实验室模拟样品和150份临床样品进行了检测,与预期结果一致。本研究建立的方法可为蜂及蜂产品中***的检验检疫提供新的、有效的技术手段。

摘要：为建立蜜蜂幼虫芽孢杆菌(***)荧光定量PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中幼虫芽孢杆菌16S r RNA基因保守序列设计特异性引物和探针,经反应体系及条件优化,建立了检测*** Taq Man荧光定量PCR方法。结果表明:该方法与其它病原无交叉反应;最低可检出1.3×10拷贝/μL的阳性质粒,比普通PCR灵敏度高100倍;重复试验显示该方法的批内和批间变异系数均小于3%。应用该方法对50份实验室模拟样品和100份临床样品进行了检测,与预期结果一致。本研究建立的方法可用于美洲幼虫腐臭病(AFB)的早期快速检测及***定量分析。

摘要：为快速鉴别诊断蜜蜂美洲幼虫腐臭病(American foulbrood,AFB)和欧洲幼虫腐臭病(European foulbrood,EFB),本研究根据Gen Bank中登录的幼虫芽孢杆菌(Paenibacillus larvae)和蜂房蜜蜂球菌(Melissiciccus pluton)16S r RNA基因序列分别设计特异性引物和探针,建立了双重Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法与其他病原无交叉反应;对***和***的检测灵敏度均达10 copies/μL的阳性质粒;重复性试验结果显示批内、批间变异系数均小于2%。应用该方法对200份实验室模拟样品和200份临床样品进行了检测,与预期结果一致。本研究建立的方法可用于AFB与EFB的快速鉴别诊断和早期监测,以及蜂产品中***和***的定量分析。