摘要：本研究通过设计引物进行PCR扩增得到绿色荧光蛋白GFP基因,将PCR产物酶切以后与芜菁花叶病毒表达载体相连,得到的阳性克隆通过多对引物组合进行PCR验证及序列测定,说明GFP基因已经连接到该病毒表达载体中,而且没有发生碱基误配及错配。该GFP表达载体的构建为进一步利用TuMv的全长cDNA侵染性克隆进行外源基因的转化奠定了基础。

摘要：以辣椒雄性不育保持系B-07LP为试材,利用正交设计L16(45)在5个水平上对影响辣椒SRAP反应体系稳定性的dNTP浓度、引物用量及Taq酶活性浓度梯度等外部条件进行了优化试验。在此基础上,通过单因素完全随机试验确定了辣椒SRAP关键反应因子的适宜浓度。其中引物浓度为0.4μmol/L、dNTP的适宜浓度为0.2 mmol/L及适宜的Taq酶活性浓度为0.3 U/μL,并对所建体系的稳定性进行了验证。

摘要：采用响应曲面法对料液比、提取时间、不同体积分数酸化甲醇提取剂3个因素进行优化,以料液比、提取时间、不同体积分数酸化甲醇提取剂为自变量,总酚提取量为响应值,利用Box-Behnken设计原理和响应曲面法,研究各自变量及其交互作用对总酚提取的影响,模拟求得二次多项回归方程的预测模型,并确定料液比1:14(g/mL)、提取时间31min、80%酸化甲醇为提取剂是最佳的提取条件。在此条件下,总酚提取量为0.67mg GAE/g,模型预测值偏差为6.9%,证明所选工艺条件为最佳工艺条件。同时,用5种方法对其抗氧化活性进行测定,结果表明大蒜具有良好的抗氧化活性。

摘要：为建立适宜大蒜（Allium sativum L.）的SSR反应体系和扩增程序,应用L16（45）正交设计对影响SSR-PCR的主要参数进行优化。结果表明,适宜大蒜的SSR反应体系总体积为20μL,其中含TaqDNA聚合酶0.02 U/μL、引物为0.2μmol/L、Mg2＋2.0 mmol/L、dNTP 0.2 mmol/L、DNA 30 mg/L;PCR适宜扩增程序为：94℃预变性3 min,94℃变性30 s,55℃45 s,72℃延伸90 s,35次循环,94℃变性30 s,53℃45 s,72℃延伸1 min,10次循环的最后一个循环延伸增加为10 min。并优化引物最适合退火温度为53.5~58.5℃。利用此反应体系对40份大蒜品种进行SSR扩增并电泳检测,扩增谱带清晰且多态性较好,证明此体系稳定可靠。在此基础上,利用优化的SSR反应体系对100对大葱SSR引物进行筛选,从中筛选出1对扩增谱带清晰稳定性好的SSR引物,并对40份大蒜品种进行遗传多样性分析。这一对SSR引物共检测出3个多态性条带可将供试材料聚为2大类,大部分品种（系）都按照其地理来源和遗传背景进行聚类。

摘要：以白皮黄瓜B-2-2为试材,采用正交设计L16（45）在4个水平上对影响黄瓜SSR-PCR反应体系的Taq酶浓度、Mg^2＋含量、模板DNA用量、dNTP浓度及引物用量等5个因素进行了试验优化,并用单因素完全随机试验筛选各反应因素的最佳水平,建立了黄瓜SSR-PCR反应的最佳体系。结果表明：在20μL反应体系中,Taq酶最适浓度为0.5U,Mg^2＋最适浓度为2.0 mmol/L,模板DNA最适用量为5 ng/μL,dNTP最适用量为0.2 mmol/L,引物最适浓度为0.6μmol/L;引物最佳退火温度为50.0℃。利用20个黄瓜材料验证此反应体系,6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在100-300 bp之间多态性高,且反应体系的稳定性和重复性好。

摘要：为探讨黄瓜脂氢过氧化物裂解酶基因(HPL)下调表达对黄瓜果实挥发性醛类物质合成的影响,设计1对特异引物,以黄瓜pDONR201-HPL质粒为模板,通过PCR扩增出323bp的片段。利用基于同源重组原理的Gateway技术,将扩增的片段通过BP反应连接到入门载体pDONR201中。对扩增出的323bp的片段进行测序,测序结果显示该序列与原序列同源性为100%。在此基础上,通过LR反应将目的片段插入过表达的植物RNA干涉载体pHellsgate8,构建黄瓜HPL基因的RNAi表达载体pHellsgate8-HPLi,分别经限制性内切酶XhoⅠ、XbaⅠ酶切后获得323bp的片段,与预期结果一致。采用热击法将pHellsgate8-HPLi转化农杆菌GV3101,经菌液PCR扩增获得323bp的目的条带,表明RNAi表达载体pHellsgate8-HPLi已成功转入农杆菌中。

摘要：分析了参与式教学方法在园艺学概论课程教学中应用的必要性,阐述参与式教学方法的特点,最后提出了参与式教学方法的设计。