摘要：以水稻OsbHLH116基因为编辑对象,根据基因编码区序列(CDS)在第一外显子区域设计长度为19bp的sgRNA,化学合成sgRNA的寡核苷酸序列,然后与CRISPR/Cas9系统表达载体pBUN411连接,再用农杆菌介导法获得水稻转基因株系,最后利用酶切和测序相结合的方法对OsbHLH116突变体进行了筛选鉴定和脱靶效应分析。结果表明,所构建的pBUN411-gRNA载体成功实现了对基因OsbHLH116的定向编辑。酶切分析表明在选取的10株T0代转基因苗中得到了6个OsbHLH116突变单株。对6个突变单株进行了TA克隆测序分析,发现了纯合突变、双等位突变和杂合突变3种类型。酶切分析表明2个潜在脱靶位点均未发生脱靶效应。

摘要：光敏色素是植物感受外界环境变化的最重要光受体之一,为研究光敏色素在水稻生长发育中的作用,本研究利用CRISPR/Cas9技术原理,设计水稻光敏色素基因PHYB的靶点,并将目的靶位点连接转化至载体pBUN411,成功构制了PHYB的CRISPR/Cas9表达载体,转化粳稻品种日本晴。由酶切及测序分析显示,转基因阳性植株中有6株靶位点序列发生改变,获得了碱基插入“A”或“T”和碱基缺失1bp或2bp的4种突变基因型,且在T0代就获得了纯合突变体。同时,本研究对T1代水稻phyB突变体进行红光照射处理,发现2叶1心期phyB突变体红光照射5d后,第3节间长度相对于野生型极显著增长。本研究利用CRISPR/Cas9系统成功对水稻PHYB基因进行了定点编辑,为进一步研究PHYB在水稻中的功能提供了参考依据。

摘要：目的提高对外医疗服务手术患者核查的准确率，保障手术安全。方法在陆地医院手术患者核查表的基础上，结合国外相应的医疗和语言背景，制定中英文和中西文“医院船手术患者核查表”。结果165例手术中，核查出患者姓名不符3例，手术部位不符1例。发生2例核查错误。结论《医院船手术患者核查表》细化了英语和西班牙语的手术核查内容，有效保障手术安全，降低手术风险，提高手术护理质量。