摘要：用棉花生殖器官优势表达启动子替代CaMV35S启动子是解决目前转基因抗虫棉存在“前期抗虫性强,后期抗虫性弱”这一生产实践问题的关键.运用反向PCR技术从陆地棉中分离到一个棉花生殖器官优势表达基因——腺苷酸核糖基化作用因子-1(Arf1)基因的启动子序列.该启动子具有独特的结构特征,不仅同时包含有转录起始子(initiator),TATA box,CAAT box和GC box这四种特异元件,而且还包含有一个5’非翻译区的内含子.通过构建四个启动子缺失突变体, 定向替换植物表达载体pBI121上的CaMV35S启动子,并与GUS基因融合,构建了4个植物表达载体.用花粉管通道技术将它们导入到棉花中,转基因棉花后代的GUS染色和荧光定量分析结果表明:Arf1启动子是一个典型的棉花生殖器官优势表达启动子,它为棉花生殖器官性状的分子设计和抗虫棉的再创新提供了有用的工具.

摘要：根据陆地棉GhTCP15基因序列,设计1对引物,通过PCR技术从海岛棉品种‘新海21号’中克隆一个同源基因,命名为GbTCP15。海岛棉GbTCP15基因具有一个1 056bp开放阅读框,编码351个氨基酸,预测分子量约为38 057.4kD,等电点为9.01,序列中含有一个高度保守的TCP结构域。氨基酸序列对比表明,海岛棉GbTCP15蛋白与其他植物中的TCP蛋白有较高的一致性,说明该基因在进化过程中是相当保守的。亚细胞定位结果显示,GbTCP15主要分布在细胞核上,推测GbTCP15在复制和转录的过程中发挥着信号转导以及转录调控等作用。进化树分析表明,海岛棉GbTCP15基因与雷蒙德氏棉GrTCP15基因分布在同一分支上。实时荧光定量PCR表明,海岛棉GbTCP15基因在茎部和15d纤维中表达量较高。研究表明,GbTCP15转录因子可能参与棉花纤维以及表皮毛的发育。

摘要：以海岛棉DJ-1(373)、天长2号(376)、5917(380)、阿长-599(381)、塔07-152(383)、S0717(408)6个品系的下胚轴为外植体,通过双因素随机区组设计的方法筛选出的两组最佳激素组合,诱导出愈伤组织,并成功获得再生植株。研究结果表明,0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT为海岛棉380、383和381愈伤组织最佳诱导条件,0.3 mg/L NAA+0.1 mg/L KT为海岛棉373、376和408愈伤组织最佳诱导条件;诱导出的愈伤组织接种于KNO3加倍的培养基可产生胚性愈伤组织;将其接种于含有0.1mg/L KT和0.05 mg/L IBA的培养基中可促进体细胞胚胎的发生和成熟,利用畸形苗的培育可缩短再生体系的周期,6个品种在6-8个月内均能获得再生植株。

摘要：【目的】评价转BT基因抗虫棉品种(系)的适应性与应用价值,为棉花新品种的选育提供适合的亲本。【方法】以90份转BT基因抗虫棉为材料,研究其农艺性状和品质性状的变异情况及相关性,并以主要农艺性状和品质性状对90份转BT基因抗虫棉进行主成分和聚类分析。【结果】供试90份转BT基因抗虫棉品种(系)纤维品质、农艺性状间差异显著,其中44份转BT基因抗虫棉为早熟材料,46份转BT基因抗虫棉为中早熟材料;前5个主成分特征值均大于1,累计贡献率达71.62%,第1主成分与产量有关,第2主成分与纤维品质有关,第3主成分与植株性状有关。90份转BT基因抗虫棉划分为4个类群,第Ⅰ类群籽指性状表现好;第Ⅱ类群断裂比强度、伸长率较好;第Ⅲ类群单株铃数、铃重、衣分较高;第Ⅳ类群纤维品质较好。【结论】筛选出了G21-2、G21-14、G21-1、G21-77等综合性状优异、铃重均在5.00 g以上、衣分在42%以上的转BT基因抗虫棉品种(系)18份。

摘要：棉花黄萎病是制约棉花产业健康发展的一种重要病害,在生产上未发现有效的根治办法,使用现代基因工程技术,从基因库中挖掘抗黄萎病相关基因,为棉花抗黄萎病育种工作的提供理论基础。本研究根据在GenBank中检索到抗黄萎病基因SDAHP(GU479467,1,3-脱氧-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶),从陆地棉基因组数据库中检索到3个同源基因(NM_016893351.1,XM_016849738.1和XM_0168151150.1),根据3个同源基因核苷酸序列设计引物,以陆地棉cDNA为模板进行克隆,获得3个目的基因,依次命名为GhDAHP-1、GhDAHP-2和GhDAHP-3。利用ProtParam和Prot Scale等在线软件对目的基因进行生物信息学分析;RT-PCR分析黄萎病菌诱导后目的基因在陆地棉叶片中的表达量。结果表明:GhDAHP-1序列全长1983 bp,氨基酸总数为539,分子质量约59.45378 kD,理论等电点pI为8.7;GhDAHP-2序列全长1832 bp,氨基酸总数516,分子质量约57.02998 kD,理论等电点pI为7.68;GhDAHP-3序列全长1652 bp,氨基酸总数517,分子质量约56.95491 kD,理论等电点pI为8.52。系统进化树分析,GhDAHP与雷蒙德氏棉(Gossypium raimindii)、木本棉(Gossypium arboreum)的亲缘关系最近。棉花叶片在黄萎病菌的处理下,GhDAHP基因表达量呈现先升高后降低的趋势,推测受到黄萎病诱导后,GhDAHP基因可能参与了黄萎病菌侵染的防卫过程。

摘要：2015年7月,张福有率田野调查队在吉林省抚松县漫江镇漫江村东部鱼池地点发现一件石磬,这在长白山地区是首次发现,意义重大。2018年5月,调查队在该地点又发现了一批以黑曜岩为主要原料的石制品,类型包括石核、石片、石叶、细石叶及各类工具等,其中工具加工较为精细。经研究,该地点的石器是一处典型的以石叶、细石叶工艺为主,同时包含有大型工具的工业类型。年代推测为旧—新石器时代过渡阶段。

摘要：本研究以19份薰衣草品种为材料,采用正交设计对ISSR-PCR反应中的5个影响因素：DNA浓度、Taq DNA聚合酶用量、Mg2＋浓度、引物浓度、d NTP浓度,进行5个水平的优化试验,并在48℃~59℃范围内摸索退火温度。研究结果建立了稳定的、可重复的薰衣草ISSR最佳反应体系和PCR扩增参数。在20μL的反应体系中,DNA模板浓度为2.50 ng/μL,Mg2＋浓度为2.00 mmol/L,d NTP浓度为0.20 mmol/L,引物浓度为0.40μmol/L,Taq DNA聚合酶为0.75 U,退火温度为52℃。该体系可为开展薰衣草种质资源的遗传多样性分析评价奠定基础。

摘要：采用均匀设计和正交设计对影响海岛棉RGA体系Mg^(2+)、dNTP、引物以及Taq DNA聚合酶浓度等因素进行了均匀优化和正交优化试验后建立了适合于海岛棉RGA的反应体系:在10μL反应体系中1×Buffer,Mg^(2+)2.5 mmol/L,dNTP 0.25 mmol/L,引物浓度1.0μmmol/L,Taq酶0.375 U/μL,DNA 20 ng。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg^(2+)浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小。运用该体系对海岛棉材料进行验证,证明该体系稳定可靠,并从22对RGA引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的10对引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为今后利用RGA标记技术进行海岛棉枯萎病研究提供了科学依据。

摘要：棉花是世界上重要的经济作物之一。为创制和改良棉花抗旱新品种提供种质资源及遗传育种研究提供理论依据,通过染色体步移技术明确外源基因在棉花染色体上的插入位点、序列及染色体信息,研究了转梭梭HaNAC基因的棉花材料对干旱胁迫的响应能力,确定了HaNAC基因的物理位置,鉴定了其遗传稳定性。研究结果如下:(1)本研究对转HaNAC38转录因子基因棉花材料进行了分子鉴定,通过PCR扩增、电泳检测及测序证实了转基因植株中分别存在标记基因和目的基因序列。应用半定量PCR,证明了HaNAC38基因在棉花受干旱胁迫后表达量上调。这些结果说明转HaNAC38基因T6代棉花植株的遗传稳定性。(2)通过标记基因的初步筛选获得阳性植株后,对转基因棉花进行外源基因的检测鉴定,利用获得的序列设计染色体步移引物,通过巢式PCR方法获得转HaNAC38基因棉花的T-DNA序列在基因组中的插入位置,结果定位到棉花基因组A11染色体第26202323 bp处。根据已知的棉花基因组信息,通过鉴定,共筛选转HaNAC38基因的棉花材料5个株系,为创制和改良棉花抗旱新品种提供了亲本材料。

摘要：【目的】研究抗病性影响因子连锁的分子标记与抗黄萎病性状的一致性,筛选抗黄萎病基因,发掘其与棉花抗黄萎病性状的关系,进一步阐明棉花抗黄萎病遗传机制。【方法】研究使用37对抗黄萎病性影响因子设计的引物进行PCR扩增来探明抗病性基因在不同抗、感病棉花品种中的分布,以及与抗黄萎病性状的一致性。【结果】发现VM13、VM23、VM25、BNL0946、BNL1414、BNL1721、em6me2和em1me5这8对引物扩增出不同条带,分别来源于抗病相关蛋白的基因、基因组序列、mRNA序列、SSR和SRAP引物;其中,引物VM13、BNL1414、em6me2扩增条带与抗病品种一致率高于0.857,与感病品种一致率低于0.25。新疆自育品种较多出现的扩增条带,与新疆自育品种一致率介于0.364-0.727,平均值为0.515;与其它地区所育品种的一致率介于0.111-0.666,平均值为0.419。【结论】引物VM13、BNL1414、em6me2的扩增条带可以作为黄萎病抗性的分子标记鉴定指标。