摘要：通过对助力自行车的受力特性分析,设计了一套全新助力自行车综合性能测试系统。该系统对助力自行车性能的测试数据进行模拟,使用磁粉测功机和伺服电机模拟骑行过程中的阻力与驱动力,来验证该实验装置的可行性。采用simulink仿真对起步性能以及坡度助力性能进行验证,并在此基础上用模拟骑行装置验证仿真结果。根据simulink仿真与模拟骑行装置实车实验结果表明:模糊控制助力方式均比传统定助力方式好。最后进行实地实车骑行实验,验证了综合性能测试系统的可行性。

摘要：针对目前助力自行车扭矩检测精度不足、动静件间信号传输难度大等问题,设计一种基于应变检测原理和磁耦合谐振无线传输原理的扭矩检测系统。其无线传输模块由带有谐振线圈的定子板和转子板组成,基于调幅调制解调技术,利用载波通讯技术,实现能量与数据传输。扭矩检测系统标定数据表明,系统的扭矩输入与电压值输出值线性度为0.99%,决定系数为R^(2)=0.9997,说明系统扭矩检测精度高。实车实验数据表明,无线传输性能稳定,测试无数据丢包现象。

摘要：为获得区别结核感染状态的血清学鉴别诊断试剂的抗原,根据GenBank中登录的结核杆菌H37Rv的ACR基因序列设计1对引物,以热灭活的结核杆菌H37Rv菌悬液为模板,PCR扩增得到ACR基因DNA片段。将扩增片段克隆于pGM-T载体中,得到载体pGM-T-ACR。分别将pET32a质粒和pGM-T-ACR质粒用限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,并将纯化的ACR基因亚克隆至pET32a中,获得重组表达质粒pET32a-ACR。将其转化***21IPTG诱导后,经SDS-PAGE、westernblot分析鉴定,可见约34ku的外源蛋白带。表明ACR基因在大肠杆菌中得到了表达。用Ni-NTAAgarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的ACR融合蛋白。

摘要：根据GenBank中发表的结核杆菌H37Rv的ESAT6基因序列设计1对引物,以热灭活的结核杆菌H37Rv菌悬液为模板,用PCR方法扩增得到ESAT6基因DNA片段。将扩增片段克隆于pGM-T载体中,成功构建克隆载体pGM-T-ESAT6。分别将pET28a-GFP质粒和pGM-T-ESAT6质粒用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,并将纯化的ESAT6基因亚克隆至pET28a-GFP中,构建原核表达载体pET28a-GFP-ESAT6。将pET28a-GFP-ESAT6转化*** 21(DE3),经IPTG诱导、SDS-PAGE和Western-blot分析,可见相对分子质量约37 200的外源蛋白带,表明GFP-ESAT6融合基因在大肠杆菌中得到了表达。用Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的GFP-ESAT6融合蛋白。

摘要：为建立一种快速、高敏感、高特异、鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,本研究根据大多数致病性结核分枝杆菌共有序列esat-6,结核分枝杆菌和牛分枝杆菌gyrB共有特异性序列,以及结核分枝杆菌种特异序列mtp40设计6对特异性引物对痰液中的结核分枝杆菌进行检测,并与鉴别培养基分离培养结果以及常规PCR鉴定结果进行比较。实验结果表明,建立的LAMP检测方法具有很高的特异性。可区分致病性结核分枝杆菌和非致病结核分枝杆菌,也可鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌。LAMP检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右,可检测到7拷贝/反应。另外,用3种方法同时检测样品发现,LAMP与细菌培养的符合率为90.91%,LAMP与常规PCR检测结果的符合率为100%。LAMP检测方法可以在流行病学调查及现场快速诊断方面广泛应用,并为临床治疗提供依据。

摘要：为优化环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）法检测牛奶中结核分枝杆菌的条件,以结核分枝杆菌高度保守的16SrRNA基因为靶基因设计3对特异性引物（F3-B3、FIP-BIP、FLP-BLP）进行试验。比较改良后的CATB/NaCl法、细菌基因组DNA提取试剂盒及热裂解法提取其DNA的效率,确定最佳的提取方法。用灭菌处理过的牛奶对结核分枝杆菌悬液进行倍比稀释以确定该检测方法的敏感度。以牛奶中常见的布鲁氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、巴氏杆菌、沙门氏菌为对照,对该方法进行特异性测试。结果表明,改良后的CTAB/NaCl法对牛奶中结核分枝杆菌DNA的提取效果要优于其他两种方法。LAMP法检测结核分枝杆菌的灵敏度为3×10^0CFU/mL,对人工阳性乳中结核分枝杆菌检测的灵敏度为3×10^1 CFU/mL。

摘要：目的:克隆新疆地区奶牛il-6基因,获得原核表达IL-6蛋白。方法:根据GenBank上牛IL-6的序列,用premier5.0软件设计一对引物。以牛肺巨噬细胞提取的RNA反转录产物(cDNA)为模板扩增出567bp的条带,克隆到pBS-T载体,测序正确后,提取质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,转化DE3菌,经IPTG诱导表达。以表达产物免疫小白鼠血清为一抗检测表达产物的反应原性。结果:成功克隆了新疆地区奶牛il-6基因,克隆部分编码188个氨基酸与GenBank公布的序列100%同源,表达出46kDa的融合蛋白,免疫印迹检测显示原核表达牛IL-6有免疫原性。结论:新疆地区奶牛在IL-6的基因序列上与其他地方牛无差异,原核表达奶牛IL-6蛋白为在奶牛乳房炎疫苗中的佐剂效果研究打下了基础。

摘要：为获得新的鉴别诊断结核杆菌感染的候选抗原,根据Gene Bank中登录的结核杆菌H37Rv的TB 9.7基因序列设计1对引物,以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增得到TB 9.7基因DNA片段。将该扩增片段克隆于PMD18-T载体中,得到载体PMD18-T-TB9.7。分别将pET32a质粒和PMD18-T-TB 9.7质粒用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,并将纯化的TB 9.7基因亚克隆至pET32a中,获得重组表达质粒pET32a-TB 9.7。将其转化*** BL21 IPTG诱导后,经SDS-PAGE、Western blot分析鉴定,可见约30ku的外源蛋白带。表明TB9.7基因在大肠杆菌中得到了表达。用Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的TB9.7融合蛋白,建立间接ELISA诊断方法,检测了30份结核病人的痰检阳性血清,120份健康人的血清,敏感性为56.6%,特异性为97%,与痰检结果的符合率为84%。

摘要：目的评价高分辨率熔解曲线(high resolution melt,HRM)技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的临床应用价值。方法用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的50株临床分离菌进行耐药性检测。以rpoB基因的利福平耐药决定区为靶标设计引物进行高分辨率熔解曲线分析,判断分离出的结核分枝杆菌是否对利福平耐药。应用SPSS 17.0分析,以传统结核分枝杆菌药敏试验结果为标准,计算两种方法的符合率。用χ~2检测分析比例法药敏结果与高分辨率熔解曲线检测结果的差异性。用Kappa检测分析两种结果的一致性。结果药敏试验结果显示,50株菌中有1株为非结核分枝杆菌;49株中有20株同时对利福平和异烟肼耐药、1株仅对利福平耐药;HRM检测结果显示,21株对利福平耐药,28株为敏感株。以传统药敏试验为参考,HRM检测利福平耐药性的敏感性为86.36%,特异性为92.59%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有高度一致性。结论 HRM可快速检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性,具有较高灵敏度,在耐药结核病的早期诊断上有一定的应用价值。

摘要：目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的应用价值。方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析。2)进一步对该结核分枝杆菌进行异烟肼耐药相关基因KatG基因和inhA基因进行异烟肼耐药决定区测序分析,筛查突变位点。3)根据筛查到的突变位点设计高分辨率熔解曲线分析所用的特异性引物,对异烟肼耐药基因耐药决定区进行高分辨率熔解曲线分析检测DNA突变,评估用高分辨率熔解曲线分析技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药性检测的效率。结果 1)比例法药敏结果显示,49株实验菌株中20株为异烟肼耐药株,29株为异烟肼敏感株。2)测序分析结果显示:(1)KatG基因出现了4种突变形式,分别是234单位点突变;234、315双位点突变;234、463双位点突变;234、315、463三位点联合突变。(2)inhA基因检测到3种突变,即-8位、-15位、-152位。3)(1)对耐药株的基因突变进行分析发现:20株异烟肼耐药株中11株存在KatG基因第315位密码子的突变、占异烟肼耐药株的55%;6株存在inhA基因-15(4株)位碱基、-8(1株)位碱基、-152(1株)位碱基的突变,共占异烟肼耐药株的30%;2株同时存在基因KatG315密码子和inhA-15位碱基的突变,占异烟肼耐药株的10%;1株均未检测到KatG基因和inhA基因的突变,占异烟肼耐药株的5%。通过基因突变检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的敏感性为95%、特异性为100%。(2)用高分辨率溶解曲线检测实验菌株耐药基因突变的结果显示,18株存在基因突变,24株不存在基因突变,检测的灵敏度为94.7%、特异性为80%。(3)以高分辨率熔解曲线检测到突变为耐药的判断标准,检出19株为耐药株,24株为敏感株。以比例法药敏结果为参照,检测的灵敏度为95%、特异性为82.76%。结论高分辨率溶解曲线用于结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的检测具有较好的灵敏度,耗时短,在异烟肼耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值。