摘要：为建立一种能快速检测奶牛乳房炎主要病原菌(大肠埃希氏菌、无乳链球菌、肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌)的多重PCR检测方法,根据大肠埃希氏菌phoA基因、无乳链球菌ef-tu基因、肺炎克雷伯氏菌Khe基因、金黄色葡萄球菌Nuc基因和肠炎沙门氏菌invA基因设计特异性引物,优化PCR反应体系与反应程序并进行特异性试验,同时分别构建含病原菌基因的pMD-19T重组质粒进行灵敏性试验。结果显示,多重PCR反应的最适引物工作浓度为0.8μmol/L,最适退火温度为59.6℃,最佳延伸时间为40 s,最合适的循环数为30次;优化后的多重PCR反应体系可扩增出5种目标病原菌的特异性条带;5种病原菌PCR检测灵敏度可达到5 copies/μL。进一步利用该多重PCR反应体系对采集的108份乳房炎乳样进行检测,检测结果显示,108份样本的阳性检出率为77.8%,大肠埃希氏菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和肠炎沙门氏菌的检出率分别为23.1%、8.3%、34.3%、8.3%、5.6%。结果表明,建立了一种具有良好特异性和灵敏性的多重PCR检测方法,在临床生产实践中可用于快速鉴定奶牛乳房炎的致病菌,为奶牛乳房炎的诊断、防控与流行病学调查提供了方法基础。

摘要：为了探索和建立奶山羊胎儿成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法,获得转基因克隆羊的供体细胞,本试验用组织块培养法分离纯化得到两株奶山羊胎儿成纤维细胞系,进行细胞形态观察、生长曲线及细胞周期和倍性分析。同时根据GenBank上发布的山羊SRY基因设计合成一对PCR引物作为性别鉴定引物,另外根据山羊BLG基因序列设计一对引物作为内参引物,建立PCR反应体系对两株胎儿成纤维细胞系进行性别鉴定。结果表明,分离的胎儿成纤维细胞活力良好,可在体外快速生长、增殖、稳定培养;阳性对照和山羊胎儿成纤维细胞系2经PCR扩增得到337 bp片段和498 bp的BLG基因片段,而阴性对照和山羊胎儿成纤维细胞系1经PCR扩增得到498 bp的β-乳球蛋白基因片段。将337 bp片段和pMD19-T载体连接,构建重组载体pSRY,通过测序证明337 bp片段为SRY基因片段。这说明有337 bp扩增带的细胞系为雄性,无337 bp扩增带的细胞系为雌性。本试验为转基因奶山羊新品种的培育奠定了基础。

摘要：在水库除险加固帷幕灌浆施工过程中,普通水泥作为灌浆材料有时达不到设计效果。改用普通水泥进行改性而成的改性灌浆水泥,具有流动性、稳定性好,能灌入细小裂隙,水泥结石具有早强、高强、高粘结强度、抗渗、耐腐蚀性好的优点,在实际工程施工中成本低,工艺简便,宜于推广。

摘要：新野礓石河王集段河道治理工程具有建设规模大、建设周期长等特点,期间在施工建设的过程中,涉及诸多建筑主体工程施工等内容,受当地的自然条件影响,很容易造成严重的水土流失,从而为周边生态环境埋下了严重的安全隐患。基于此,必须要对河道加强治理工作,围绕治理工程实际内容,落实水土保持措施,从而能够有效解决水土流失问题,更好地保护当地自然生态环境。在此次研究过程中,首先对该区域的工程项目情况进行了简单的介绍分析,随后从植物设计、施工、水土保持监测等方面入手,分析讨论了石河王集段河道治理工程水土保持策略,希望能够为相关研究提供一定的参考。

摘要：【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)Quaking基因敲除细胞株,并检测Quaking基因对NIH3T3细胞增殖能力的影响。【方法】首先,利用在线网站设计两条靶向作用于Quaking外显子的sgRNA,成功构建了两个分别靶向Quaking基因第1、第2外显子的CRISPR/Cas9重组慢病毒质粒。将构建的Quaking基因CRISPR/Cas9重组慢病毒载体和pcDNA3.1-Quaking过表达质粒共转染至HEK293T细胞中,通过Western blot实验检测Quaking蛋白的敲除效率。其次,将筛选得到的敲除效率高的重组慢病毒质粒(LentiCRISPRv2-sgRNA1)与辅助包装质粒共转染入HEK293T细胞进行慢病毒包装,慢病毒转导NIH3T3细胞后,利用嘌呤霉素筛选阳性单克隆细胞株。最后,通过Western blot及免疫荧光染色鉴定敲除效果。【结果】发现Quaking蛋白在该细胞株中不表达,并测序证实了发生片段敲除。CCK8检测发现,Quaking基因敲除显著抑制了NIH3T3细胞的增殖能力。【结论】本研究首次通过CRISPR/Cas9技术成功构建了小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)Quaking基因敲除细胞株,为后续研究Quaking基因在小鼠生理功能调节中的作用机制提供了体外模型基础。

摘要：在河南省南阳市政府实施“四水共治”战略、全面实施河长制的大背景下,南阳市开展河湖专项整治行动,在全市范围内河湖持续开展“地毯式清四乱、三污一净、打击河湖非法采砂”专项整治行动,实现河长制从“有实”向“有为”转变。利用无人机技术进行河道巡查,通过拍摄河道流域视频和重点区域照片,结合河道管理范围,可提取疑似乱占、乱采、乱堆以及乱建等信息,实现基于影像资料的信息化管理。该项技术的成功应用,得到了河道管理部门和水政执法部门的肯定,受到了主管河长的好评,为河道管理提供了宏观辅助决策支持。

摘要：文章扼要地介绍了中海油天津化工研究设计院针对浙江新安化工集团股份有限公司有机硅厂循环水系统无磷缓蚀药剂的开发和现场运行方案。新安化工有机硅厂补充水水质属于低硬度低碱度,在采用无磷缓蚀药剂解决排放问题的同时,取得了令人满意的应用效果。

摘要：根据已知的BLG序列设计引物,通过PCR技术克隆同源臂序列,5′端同源臂2 264bp,包括外显子1,3′端同源臂4 461bp,包括全部的外显子3、4、5、6、7,分别连入克隆载体pMD18-T Simple载体中并测序。然后以含有正负筛选标记基因的ploxpⅡ载体为基础,将5′端和3′端同源臂片段先后连入其中,进行酶切、PCR鉴定。将构建好的基因敲除载体转化组成型表达Cre重组酶的大肠杆菌BM25.8,验证Loxp位点的活性。结果表明,构建了奶山羊BLG基因第2外显子缺失的基因敲除载体pBLG2T,且pBLG2T载体中的正选neo基因可以被Cre重组酶去除。为获得BLG 1条等位基因缺失型细胞株以及培育高产优质奶山羊新品种奠定基础。

摘要：混凝土防渗墙是水工建设中采用的一种地下连续墙,是透水体处理的一种有效措施,它是利用专业的造槽机械设备营造槽孔,并在槽孔内注满泥浆,以防孔壁坍塌,最后用导管在注满泥浆的槽孔中浇筑混凝土并置换出泥浆,筑成墙体。墙体既可以做成刚性的,也可以做成塑性、柔性的。本文通过该技术在唐河县倪河水库除险加固工程中的应用,介绍了在大坝除险加固中混凝土防渗墙方案的合理选用及薄壁液压抓斗法混凝土防渗墙的施工技术要点及注意事项。

摘要：对南阳市水资源条件及开发利用状况进行分析研究,采用用水总量指标、地下水开采量、地表水利用率等单项指标和综合计算评价等方面计算了南阳市及各县区水资源承载能力,评价了水资源承载现状,分析了超载成因,提出有关对策和建议,为下一步更好地开发利用和保护水资源提供了借鉴。