摘要：目的:比较人端粒酶催化亚单位(hTERT),癌胚抗原(CEA)及巨细胞病毒(CMV)启动子在人结肠癌细胞株LoVo和SW480中的转录活性。方法:设计引物应用PCR法从人结肠癌基因组中克隆hTERT和CEA启动子;用双酶切和PCR法切除原始载体pLVX-EGFP-3FLAG中的CMV启动子后,将hTERT,CEA启动子与该载体重组,构建出重组质粒pLVX-hTERTp-EGFP-3FLAG和pLVX-CEAp-EGFP-3FLAG;将上述两种质粒及原始载体(含CMV启动子)分别瞬时转染人结肠癌细胞株LoVo和SW480后,检测两种细胞株绿色荧光蛋白表达。结果:经PCR,酶切及测序鉴定,克隆及载体构建完全正确。CMV,hTERT及CEA启动子的转录活性(绿色荧光细胞数/总细胞数)在LoVo细胞中依次为54.7%,33.0%,9.5%;在SW480中依次为16.5%,10.1%,8.5%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:在人结肠癌细胞株中,转录活性以CMV启动子最高,hTERT启动子次之,CEA启动子最低。该结果可为结肠癌的靶向性基因治疗研究提供参考。

摘要：目的构建5个拷贝的HRE和hTERTp双靶向调控表达CDX2基因的慢病毒表达载体,并在结肠癌LoVo细胞中检测其启动活性。方法设计引物应用PCR法从人结肠癌基因组中克隆获得hTERT启动子,用双酶切和PCR法切除笔者所在课题组已构建的载体pLEGFP-5HRE-CEAp中的CEA启动子后,将hTERT启动子与该载体重组,构建出pLEGFP-5HRE-hTERTp;提取5HRE-hTERTp基因序列,同时双酶切切除pLVX-EGFP-3FLAG载体中的CMV启动子,同源重组构建获得pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG载体。设计引物应用PCR法从笔者所在课题组已构建的GV230-CDX2-EGFP载体中克隆获得CDX2基因序列,用双酶切和PCR法切除载体pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG中的EGFP后,将CDX2基因序列与该载体重组,构建出pLVX-5HREhTERTp-CDX2-3FLAG。应用pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG载体瞬时转染体外培养的人结肠癌LoVo细胞,通过观察绿色荧光蛋白EGFP的表达,鉴定hTERTp的启动活性。结果经PCR和测序分析,pLEGFP-5HREhTERTp、pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG和pLVX-5HRE-hTERTp-CDX2-3FLAG 3组质粒与设计一致,测序正确。将pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG载体瞬时转染体外培养的人结肠癌LoVo细胞,有绿色荧光表达,提示hTERT启动子能够有效启动下游基因的表达。结论成功构建了pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG及pLVX-5HRE-hTERTp-CDX2-3FLAG载体,为后续的体外和体内研究打下了基础。

摘要：目的对比不同来源一线住院医师所管理的外科手术后患者满意度及术后短期的生活质量,并分析其影响因素,为提供优质医疗服务理念下住院医师培养提供参考。方法将本院一线住院医师分为三类:本院职工一线及外院高资历进修医师(简称高资历医师)、本院专业型硕士研究生(简称专硕)、社会规范化培训医师(简称规培医师)。所有病例均为来自同一临床治疗组并分别由以上三类医师作为住院医师所管理的结直肠癌术后患者。采用自行设计的问卷及引用EORTC QLQ-C30,对2014年1月至2017年10月在我院普通外科住院符合条件的176例患者进行了满意度问卷调查及生活质量评估,问卷回收率为90.3%。结果在患者整体就诊满意度上专硕医师组优于其他两组医师,在短期生活质量上三组患者总体均较高,但高资历医师组有优于其他两组的趋势,而规培医师组介于二者之间。结论医学是一门实践性很强的学科,高资历医师实践经验丰富,临床问题识别处理能力较强,但同患者沟通耐性不足,因此病患术后整体生活质量较高,但满意度偏低。专硕医师专业理论知识牢靠、医患关系单一,具有极高的职业兴趣和对医学未来的憧憬,其与病患沟通充分。因此在住院医师培养过程中,既要重视专业能力的培养,还要强调对患者人文关怀的理念,这样才能给患者提供更加优的医疗服务,有利于我国医学及医患关系向健康稳定的方向发展。